[发明专利]葡萄球菌肠毒素的二维分子印迹阵列式质量传感检测方法

摘要

本发明公开了一种葡萄球菌肠毒素的二维分子印迹阵列式质量传感检测方法，包括如下步骤：(1)石英晶振电极表面活性处理；(2)初始溶胶凝胶的制备；(3)含有SEA和SEB的模板的印迹溶胶凝胶的制备；(4)对石英晶振电极表面进行涂布处理；(5)去除模板蛋白分子SEA和SEB；6)SEA和SEB检测的分子印迹阵列式质量传感器的构建，本发明针对食品中毒重要致病因子葡萄球菌肠毒素中常见的SEA和SEB大分子蛋白进行快速检测。方法简单、不需任何标记，检测快速，受外界干扰较小，成本低，结果稳定可靠，整个检测过程时间短，在食品安全、卫生检测、环境监测、临床检验、生物恐怖监测等领域具有广泛的应用前景。

主权项

一种葡萄球菌肠毒素的二维分子印迹阵列式质量传感检测方法，其特征是包括如下步骤：(1)石英晶振电极表面活性处理；将三个表面镀金的石英晶振电极浸入0.05‑0.2M的11‑巯基醇酸的乙醇溶液中，浸泡8‑16h，取出，用无水乙醇冲洗，氮气吹干，分别标记为A、B和C电极；(2)初始溶胶凝胶的制备：将2～3mL原硅酸四乙酯，100～200μl苯基三甲氧基硅烷，100～200μl甲基三甲氧基硅烷，400～600μl浓度为0.05‑0.2M的HCl水溶液和2～3ml的H2O混合，超声20～30分钟制备成初始溶胶凝胶；(3)含有SEA或SEB模板的印迹溶胶凝胶的制备：取2～4mL初始溶胶凝胶和100～200μl浓度为0.1～0.3mg/mL的SEA磷酸盐缓冲液，混合均匀，超声20‑40分钟，获得含有SEA模板的印迹溶胶凝胶；取2～4mL初始溶胶凝胶和100～200μl浓度为0.1～0.3mg/mL的SEB的磷酸盐缓冲液，混合均匀，超声20‑40分钟，获得含有SEB模板的印迹溶胶凝胶；(4)对石英晶振电极表面进行涂布处理：①以1000～3000转/分钟的转速将所述含有SEA模板的印迹溶胶凝胶均匀涂布于所述A电极表面20～30秒，以1000～3000转/分钟的转速将所述含有SEB模板的印迹溶胶凝胶均匀涂布于所述B电极表面20～30秒，静置10～15分钟，用水冲洗掉表面物理吸附的所述凝胶，用氮气吹干；②重复步骤①3‑5次；得到表面结合有分子印迹聚合物膜的石英晶振电极，室温下干燥；③将步骤(2)获得的初始溶胶凝胶，以1000～3000转/分钟的转速均匀涂布于C电极表面20～30秒，静置10～15分钟，用水冲洗掉表面物理吸附的所述凝胶，用氮气吹干；④重复步骤③3‑5次；室温下干燥；(5)去除模板蛋白分子SEA和SEB：用40～50℃的双蒸水对步骤(4)中步骤②获得的电极进行冲洗，去除模板蛋白，用氮气吹干，得到包被有分子印迹膜的石英晶振电极A和B，并置于室温下干燥后备用；用40～50℃的双蒸水对步骤(4)中步骤④获得的C电极进行冲洗，用氮气吹干，得到参比电极，并置于室温下干燥后备用；(6)葡萄球菌肠毒素的二维分子印迹阵列式质量传感器的构建及待测液检测：将包被有分子印迹膜的石英晶振电极A和B以及参比电极C分别置于三个加样池中，并连接于石英晶体微阵列传感器E4上，构建出葡萄球菌肠毒素的二维分子印迹阵列式质量传感器，往各加样池中加入200μl PBS，待其频率稳定后分别向浸有包被有分子印迹膜的石英晶振电极A、B的加样池中分别加入200μl待测液，检测频率变化直至稳定，检测待测液中葡萄球菌肠毒素SEA或SEB。