[发明专利]一种梨果实内韧皮部同化物卸载路径的荧光示踪方法

摘要

本发明公开了一种梨果实内韧皮部同化物卸载路径的荧光示踪方法，步骤包括：荧光溶液的配制、荧光溶液的引入、采样、制备切片、观察拍照等过程，为研究果实内糖的转运提供了有效的方法。本发明以5(6)羧基荧光素酯(5(6)-carboxyfluoresein diacetate，CFDA)作为荧光示踪物质，在不需要专门设备和装置的条件下，通过果柄部位将CFDA溶液引入韧皮部，达到快速、有效地标记梨果实发育过程中韧皮部同化物卸载路径的目的。该方法的优点是不需要特殊的装置、操作简单、不易伤及木质部且荧光溶液不易蒸发，在荧光观察过程中不需样品的特殊处理、成本低廉。

主权项

一种梨果实内韧皮部同化物卸载路径的荧光示踪方法，其特征在于包括以下步骤：(1)配制1～2mg/mL荧光染料CFDA溶液；(2)步骤(1)配制的CFDA溶液的引入：轻轻磨擦果柄表皮，不要伤及木质部→迅速将棉花团缠绕在果柄上→用封口膜将棉花团封好→采用微量注射器将配制好的CFDA溶液缓慢注入棉花，每个果实注入150～250μl上述配制好的CFDA溶液→立即用封口膜密封针孔防止溶液外渗→然后用锡箔纸将果柄部位覆盖好，防止CFDA见光分解；(3)采样：经CFDA溶液处理48～72h后采摘果实；(4)制备切片：将新鲜的经CFDA溶液处理过的果实，切取带有维管束的果肉组织块，然后切片，每完成一个切片用载玻片直接沾取切片，使切片平铺于载玻片的中央；(5)观察拍照：制备好的切片，立即用荧光显微镜观察CF在果实内的分布图像，防止荧光淬灭。