[发明专利]一种梨果实内韧皮部同化物卸载路径的荧光示踪方法

权利要求书

1.一种梨果实内韧皮部同化物卸载路径的荧光示踪方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)配制1～2mg/mL荧光染料CFDA溶液；

(2)步骤(1)配制的CFDA溶液的引入：轻轻磨擦果柄表皮，不要伤及木质部→迅速将棉花团缠绕在果柄上→用封口膜将棉花团封好→采用微量注射器将配制好的CFDA溶液缓慢注入棉花，每个果实注入150～250μl上述配制好的CFDA溶液→立即用封口膜密封针孔防止溶液外渗→然后用锡箔纸将果柄部位覆盖好，防止CFDA见光分解；

(3)采样：经CFDA溶液处理48～72h后采摘果实；

(4)制备切片：将新鲜的经CFDA溶液处理过的果实，切取带有维管束的果肉组织块，然后切片，每完成一个切片用载玻片直接沾取切片，使切片平铺于载玻片的中央；

(5)观察拍照：制备好的切片，立即用荧光显微镜观察CF在果实内的分布图像，防止荧光淬灭。

2.根据权利要求1所述的梨果实内韧皮部同化物卸载路径的荧光示踪方法，其特征在于配制1～2mg/mL荧光染料CFDA溶液的方法为：用体积比为1∶1的DMSO水溶液溶解CFDA，配成1～2mg/mL的CFDA溶液后避光备用。

3.根据权利要求1所述的梨果实内韧皮部同化物卸载路径的荧光示踪方法，其特征在于步骤(4)中所切取组织块的大小为1cm×1cm×2cm；制备切片时，使用冰冻切片机进行连续切片，切片前用普通胶水冷固20～30min、冷固温度为-20℃，切片厚度20μm；或者直接将果实的观察部位进行徒手横切或纵切，制备徒手切片。

4.根据权利要求1所述的梨果实内韧皮部同化物卸载路径的荧光示踪方法，其特征在于步骤(5)观察时采用488nm激光激发，蓝色滤光片检测图像，目镜为2.5×，物镜为10×。