[发明专利]聚合酶链式反应鉴别熊胆粉真伪的方法

摘要

本发明为一种聚合酶链式反应鉴别熊胆粉真伪的方法，包括样品的基因组提取，用于扩增的样品的聚合酶链式反应引物，及扩增的聚合酶链式反应体系和扩增条件和扩增结果，聚合酶链式反应扩增产物的检测系统来鉴别熊胆粉样品的真伪；该鉴别方法简单可靠，减少假冒伪劣的中药材熊胆及其熊胆粉给患者造成的不良后果，对于提高中药质量，保障群众用药安全以及更好地开拓中药的国内外市场等方面都具有十分重要的意义。

主权项

一种聚合酶链式反应鉴别熊胆粉真伪的方法，其特征在于，a、样品的基因组提取方法取熊胆粉2克，伪品鸡、羊、牛、猪胆汁干燥品各2克，放入各自的试管中，采用酚‑氯仿‑异戊醇抽提方法对其基因组DNA进行提取；b、用于扩增的样品的聚合酶链式反应引物上游引物：5'  CGCCATGAACCCTCCCTCTA  3'   下游引物：5'  CCTGGGCAGTGAATCCCTCTT  3' c、用于扩增的聚合酶链式反应体系和扩增条件在反应体系中：取50ng/μl样品的DNA模板2μl，10倍缓冲液  2μl ， 2.5mM 的脱氧核糖核苷三磷酸2μl，上游引物：5'  CGCCATGAACCCTCCCTCTA 3' 1μl，下游引物：5'  CCTGGGCAGTGAATCCCTCTT  3'  1μl，聚合酶0.2μl放入试管中，用灭菌去离子水补充至25μl；其扩增条件： 94.0℃ 8分钟；之后35个循环包括：94.0℃  1分钟 ，58.6℃  1分钟， 72.0℃  2分钟，最后72.0℃ 10分钟；得到聚合酶链式反应扩增产物；d、聚合酶链式反应扩增产物的检测方法在水平电泳槽中制备其浓度1.5%琼脂糖凝胶；将上述聚合酶链式反应扩增产物 5µl加入点样孔，在对比孔中加入5 µl分子量标准 2000型作为对比；电压120 V，电泳40min后在图谱成像系统中成像；e、通过电泳图谱判断熊胆样品的真伪。