[发明专利]猪传染性胃肠炎病毒等温扩增技术快速检测试剂盒及检测方法有效
申请号: | 201110386922.7 | 申请日: | 2011-11-29 |
公开(公告)号: | CN102373301A | 公开(公告)日: | 2012-03-14 |
发明(设计)人: | 聂福平;徐自忠;李应国;肖进文;王国民;杨俊;李贤良;陈瑞;王昱 | 申请(专利权)人: | 重庆出入境检验检疫局检验检疫技术中心;聂福平 |
主分类号: | C12Q1/70 | 分类号: | C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93 |
代理公司: | 重庆市恒信知识产权代理有限公司 50102 | 代理人: | 刘小红 |
地址: | 400020*** | 国省代码: | 重庆;85 |
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摘要: | 本发明设涉及动物疫病分子生物学检测方法及检测试剂领域,具体涉及一种猪传染性胃肠炎病毒等温扩增技术(NASBA)快速检测用引物、试剂盒及其检测方法。本发明根据猪传染性胃肠炎病毒的基因序列,用ClustalW进行多重比对,分析序列的保守区,采用Primer5.0引物设计软件,分别设计引物和探针,可特异性的实现快速对猪传染性胃肠炎病毒的检测与鉴别。配制各种反应溶液组成相应的检测试剂盒。利用本发明的试剂盒具有作简便,特异性强、灵敏度高、可重复性高,且没有复杂的后处理,适用性广等优点。 | ||
搜索关键词: | 传染性 胃肠炎 病毒 等温 扩增 技术 快速 检测 试剂盒 方法 | ||
【主权项】:
猪传染性胃肠炎病毒等温扩增技术快速检测试剂盒,其特征在于:它包括NASBA‑Ⅰ和NASBA‑Ⅱ,可特异性的扩增猪传染性胃肠炎病毒,其中:所述NASBA‑Ⅰ包括NASBA扩增反应液管、NASBA反应酶Mix管、阳性对照管、阴性对照管和DEPC水管;NASBA扩增反应液管由以下反应液组成:序列为SEQ ID NO1的上游引物10 mmol/L的上游引物0.5 μL,序列为SEQ ID NO2的下游引物10 mmol/L的上游引物0.5 μL,NASBA buffer缓冲液7.0 μL,1mmol/L的氯化钾溶液 1.2μL,DEPC水 0.8 μL,合计10 μL,为单次反应的用量;NASBA反应酶Mix管由以下反应液组成:T7 RNA 聚合酶10μL,终浓度为40U;AMV 16μL,终浓度为8U;RNase H 0.1μL,终浓度为0.2U;RNasin 5μL,终浓度为12.5UBSA 1.3μL,终浓度为2.6ug/μL,NASBA buffer缓冲液17.6μL,合计50μL,为10次反应的用量;阳性对照管:为猪传染性胃肠炎病毒标准毒株的阳性重组质粒,体积20μL/管;阴性对照:管内为猪传染性胃肠炎病毒阴性的猪血清,体积50μL/管;DEPC水管:1mL~2mL;所述NASBA‑Ⅱ包括杂交缓冲液、探针混合液、检测浓缩液、显色液、终止液、10×TBST缓冲液和酶标板;探针混合液:包含100nmol/L通用探针SEQ ID NO3,100nmol/L检测探针SEQ ID NO4,体积比1:1。
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