[发明专利]猪传染性胃肠炎病毒等温扩增技术快速检测试剂盒及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及的猪传染性胃肠炎病毒检测试剂盒，属于动物疫病分子生物学检测方法及检测试剂领域，具体是一种用于猪传染性胃肠炎病毒的等温扩增技术检测试剂盒。本发明还应用该试剂盒对猪传染性胃肠炎病毒进行等温扩增检测的生物学检测方法。

背景技术

猪传染性肠胃炎病毒（Transmissible gastroenteritis of swine virus，TGEV）属冠状病毒科冠状病毒属，是引起仔猪病毒性腹泻的重要病原，引起猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis of swine , TGE）。TGE是一种急性、高度接触性传染病，以呕吐、严重腹泻、脱水和对2周龄以内仔猪的高度致死为特征。最早报道于1933年在美国依利诺斯州发现。目前该病已成世界流行，中国、美国、日本、英国、加拿大等均有报道。不同年龄和不同品种的猪对本病都易感，2周龄的仔猪死亡率达90%～100%，给养猪业造成了巨大的经济损失。除猪外，其他动物对该病毒无易感性，但猫、犬、狐狸、燕、八哥等也可以携带病毒，间接引起本病的发生。该病是OIE规定猪的重要疫病，我国也将其列为进境动物必检的疫病。

目前，针对猪传染性胃肠炎病毒现有的检测方法包括ELISA 检测方法，核酸探针杂交技术检测，RT-PCR方法等。传统的病毒抗原的 ELISA 检测方法不能鉴别检测传染性胃肠炎病毒和猪呼吸道冠状病毒（PRCV），而阻断ELISA从血清学上鉴定 TGEV/PRCV 感染猪，也只是发病后对恢复期血清的回顾性检测。核酸探针杂交技术检测包括放射性探针杂交和非放射性探针检测。用放射性同位素标记的探针杂交检测试验的灵敏和特异性都很好，但放射性同位素对人体有害，处理方法复杂，一般实验室无法进行。非放射性探针检测方法的灵敏性和特异性不如放射性同位素标记的探针。与传统的血清学和免疫学检测方法相比PCR方法有许多优点。目前，用于TGEV检测的RT-PCR主要有多重RT-PCR，巢式RT-PCR, 荧光定量RT-PCR。虽在特异性和灵敏度方面有所突破，但都需要特特殊的仪器，成本较贵，应用范围有限。因此，发明一种可快速鉴别检测猪传染性胃肠炎病毒的检测方法对进境动物口岸检验,防止该病毒的传播以及研究我国猪群中TGEV的感染情况具有重要意义。

国内外在病原体的检测方法方面，利用NASBA方法对多种动物疫病和微生物检测已有很多报告，但在兽医临床检测方法，尚未见有猪传染性胃肠炎病毒的NASBA检测方法。