[发明专利]基于环介导等温扩增技术的鸭疫里默氏杆菌的核酸检测方法

摘要

本发明公开了一种基于环介导等温扩增技术的鸭疫里默氏杆菌的核酸检测方法。所述方法为：根据鸭疫里默氏杆菌gyrB基因设计特异性的引物序列，提取待测样品的DNA为模板，进行LAMP反应；对LAMP结果进行分析，若LAMP扩增结果为阳性，则待测样品含有鸭疫里默氏杆菌。本发明提供的针对鸭疫里默氏杆菌的检测方法，具有简便、快速、特异、灵敏和经济的优点，结果判断方法简便，适合于临床或者基层实验室使用，具有广阔的应用前景。

主权项

一种基于环介导等温扩增技术的鸭疫里默氏杆菌的核酸检测方法，其特征在于，通过使用特异性引物，利用环介导等温扩增技术体系扩增靶基因的特定区域；所述特异性引物为：  引物  类别  序列组成  F3  外引物  5’‑AGAGCGAGAAGAAAAAACCT‑3’  B3  外引物  5’‑CTCCCATAAGCATAGAGAAGA‑3’  FIP  内引物  5’‑GGTTCATTTCCCCAAGACCTTTATA‑TAGAAATGTCTGCCGATGG‑3’  BIP  内引物  5’‑CAGAACAACTTTGGGAAACTACACT‑CTATCTGCTTCACCTGCA‑3LAMP检测的反应体系组成如下：2xU‑LAMP反应混合液(2xU‑LAMP反应混合液是购买的试剂盒，其组成为：40mM Tris‑HCl(pH 8.8)、20mM KCl、20mM(NH4)2SO4、10mM MgSO4、0.2％Triton X‑100、2.4mM dNTPs、1.6M甜菜碱；)10ul；10x引物混合液1ul，其组成为：引物F3为2uM，引物B3为2uM，引物BIP为12uM，引物FIP为12uM；模板DNA1ul、Bst聚合酶0.75ul、补水至20ul；LAMP反应条件：63℃60min→80℃5min→‑20℃保存。检测过程同时设置阴性对照和阳性对照，所述的阳性对照为含有鸭疫里默氏杆菌gyrB目的基因的DNA(鸭疫里默氏杆菌基因组DNA或含鸭疫里默氏杆菌gyrB基因的重组质粒DNA)，所述阴性对照为不同于靶基因的DNA，并使用电泳分析或Sybrgreen I荧光染料紫外灯下显色同时检测阴阳对照扩增产物。