[发明专利]一种采用微载体高密度细胞培养技术生产猪瘟活疫苗的方法

摘要

一种采用微载体高密度细胞培养技术生产猪瘟活疫苗的方法，其特点是将传代贴壁细胞MPK细胞接种到装有微载体的生物反应器中，细胞生长所需的培养基灌注到生物反应器，MPK细胞在反应器内快速增殖，当细胞密度稳定后接种猪瘟病毒，并开始连续收获猪瘟病毒培养液，得到的病毒培养液经澄清、浓缩，在加入稳定剂和缓冲液配苗后，真空冷冻干燥制成猪瘟活疫苗。本发明采用微载体高密度细胞培养技术，细胞密度在生物反应器内可达到8～16×106个/ml，病毒培养液的收获量比转瓶培养的提高了20～40倍，显著提高猪瘟活疫苗生产效率和产量，降低生产成本，减轻疫苗的副反应，增强疫苗生产的批次稳定性，得到更为安全有效的猪瘟活疫苗。

主权项

一种采用微载体高密度细胞培养技术生产猪瘟活疫苗的方法，其特征在于将传代贴壁细胞MPK细胞接种到装有微载体的生物反应器中，细胞生长所需的营养培养基经连续灌注的方式加入生物反应器，MPK细胞在反应器内快速增殖，当细胞密度稳定后接种猪瘟病毒，并开始连续收获猪瘟病毒培养液，由此得到的病毒培养液经澄清、浓缩，在加入稳定剂和缓冲液配苗后，真空冷冻干燥制成猪瘟活疫苗，具体步骤为：（1）将MPK细胞在转瓶内扩增；（2）经转瓶培养得到足量的细胞后，接种到装有微载体的生物反应器中开始高密度细胞增殖培养；（3）当反应器内细胞密度增长稳定后，接种猪瘟病毒；（4）在接种病毒后第三天，开始连续收获反应器内的病毒培养液，收获期维持25～35天；（5）收集到的病毒培养液，经澄清、浓缩，加入稳定保护剂和pH缓冲液配制成疫苗原液，再将原液分装，经冷冻干燥得到猪瘟活疫苗成品。