[发明专利]人血清白蛋白和肿瘤坏死因子的融合的方法无效
| 申请号： | 201110264949.9 | 申请日： | 2011-09-08 |
| 公开（公告）号： | CN102443587A | 公开（公告）日： | 2012-05-09 |
| 发明（设计）人： | 王灿珍;唐灿;孙晨;黄先进 | 申请（专利权）人： | 上海深元生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/14 | 分类号： | C12N15/14;C12N15/28;C12N1/19;C12N1/21;C07K19/00;C12R1/19;C12R1/84 |
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| 地址： | 200331 上海市普陀*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种生物合成的方法特别涉及到人血清蛋白与抗肿瘤因子的融合方法。它可以延长药物在体内的半衰期，减小毒性，从而提高抗肿瘤的效果，提高产量。为完成上述发明的目的：包括以下步骤：（1）基因扩增及表达菌株的构建；(2)诱导表达；（3)表达产物分析取发酵液上清进行SDS-PAGE分析；(4)产物体外生物活性测试，细胞测活，生物学活性并与照品对比。本发明的特点是：分别选用大肠杆菌和毕氏酵母作为表达宿主菌，构建人血清白蛋白和抗肿瘤因子基因链接的融合表达菌种，用以表达白蛋白和抗肿瘤因子的融合蛋白，优点是：延长药物在体内的半衰期，减小毒性从而提高抗肿瘤的效果提高产量。 | ||
| 搜索关键词： | 血清 白蛋白 肿瘤 坏死 因子 融合 方法 | ||
【主权项】：
一种人血清白蛋白和肿瘤坏死因子的融合的方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）基因扩增及表达菌株的构建； 用T4DNA 连接酶将目的人血白蛋白基因片段与载体连接，连接产物转化大肠杆菌菌株和毕氏酵母菌，挑取阳性克隆，电泳验证结果；（2）诱导表达； 分别挑取重组体单菌落接种于大肠杆菌LB培养基中和酵母菌YPD培养基中，振荡过夜培养诱导表达，产生融合蛋白； （3）表达产物分析取发酵液上清进行SDS‑PAGE 分析，并进行Western‑blotting分析 ；（4）产物体外生物活性测试，细胞测活，生物学活性并与照片对比。
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