[发明专利]人血清白蛋白和肿瘤坏死因子的融合的方法

权利要求书

1.一种人血清白蛋白和肿瘤坏死因子的融合的方法，其特征在于：包括以下步骤：

（1）基因扩增及表达菌株的构建；

 用T₄DNA 连接酶将目的人血白蛋白基因片段与载体连接，连接产物转化大肠杆菌菌株和毕氏酵母菌，挑取阳性克隆，电泳验证结果；

（2）诱导表达；

 分别挑取重组体单菌落接种于大肠杆菌LB培养基中和酵母菌YPD培养基中，振荡过夜培养诱导表达，产生融合蛋白；

 （3）表达产物分析取发酵液上清进行SDS-PAGE 分析，并进行Western-blotting分析 ；

（4）产物体外生物活性测试，细胞测活，生物学活性并与照片对比。

2.根据权利要求1所述的一种人血清白蛋白和肿瘤坏死因子的融合的方法，其征在于：所述的人血白蛋白基因片段的基因序列如图1所示。

3. 根据权利要求1所述的一种人血清白蛋白和肿瘤坏死因子的融合的方法，其征在于：采用PCR方法进行聚合酶链反应，用设计的引物合成上述人血清白蛋白基因。

4.根据权利要求3所述的一种人血清白蛋白和肿瘤坏死因子的融合的方法，其征在于：引物设计：

上游：GC GGATCC  AAG TTA GTG ACA GAT CTT ACC；

下游：GC GAATTC  CTC GGC AAA GCA GGT CTC CTT 。

5.根据权利要求1所述的一种人血清白蛋白和肿瘤坏死因子的融合的方法，其征在于：.TNF基因信息为图2。

6.根据权利要求4所述的一种人血清白蛋白和肿瘤坏死因子的融合的方法，其征在于：.TNF引物设计：

上游：GC GAATTC  ATG CGC AAA CGT GTC AGA TCA ；

下游：GC CTCGAG  TCA CAG GGC AAT GAT CCC AAA 。