[发明专利]一种海洋微藻细胞内淀粉含量的测定方法

摘要

一种海洋微藻细胞内淀粉含量的测定方法。本发明针对海洋微藻细胞的物质组成特点，首先采用乙醇、石油醚、90％乙醇对微藻细胞依次进行脱脂、脱色及脱糖处理，再采用0.6～0.8g/ml的硝酸钙溶液作为微藻细胞内淀粉的提取剂，煮沸15～30min以充分提取微藻细胞内的淀粉，其次采用过氧化氢氧化残余还原糖和残留色素并煮沸赶出过量的过氧化氢，最后以碘作为显色剂，利用分光光度法直接测定海洋微藻中的淀粉含量。该申请技术与常用的陆生植物中淀粉含量的测定方法相比，过程简单，实验周期短，结果准确，重现性好。

主权项

一种海洋微藻细胞内淀粉含量的测定方法，其特征在于包括如下步骤：a.将待测微藻样品在3000～3500rpm离心3～8min得到微藻藻泥，用去离子水反复清洗3遍；b.将步骤a所得的微藻藻泥反复冻融4～6次后，超声处理10～20min，准确称重并记录质量；c.将步骤b所得的微藻藻泥与无水乙醇混合，振荡3min后，3000～3500rpm离心3～8min，收集沉淀；所述无水乙醇与步骤b中微藻藻泥的比例为6ml∶1g；d.向步骤c所得沉淀中加入沸程为60～90℃的石油醚，混合振荡5min后，继续加入90％乙醇，再混合振荡5min，在3000～3500rpm离心3～8min并收集沉淀；所述石油醚与步骤b中微藻藻泥的比例为4ml∶1g，所述乙醇与步骤b中微藻藻泥的比例为6ml∶1g；e.将步骤d重复三次；f.向步骤e所得沉淀中加入0.6～0.8g/ml的硝酸钙溶液，煮沸10～30min后冷却至室温；所述的硝酸钙溶液与步骤b中微藻藻泥的比例为10ml∶1g；g.向步骤f所得溶液中加入30％的过氧化氢，振荡反应20min后，加入0.05mol/L盐酸，煮沸20min后冷却至室温；所述30％过氧化氢的体积、0.05mol/L盐酸的体积与步骤b中微藻藻泥的比例均为2ml∶1g；h.步骤g所得溶液经过3000～3500rpm离心3～8min，收集上清液，沉淀再以f步骤重复处理3～5次，合并所有上清液作为待测样品溶液；i.步骤h所得的待测样品溶液，与I2 KI标准溶液进行显色反应，于570nm波长下测定其吸光度值，利用淀粉标准曲线计算待测样品溶液中的淀粉含量。