[发明专利]油脂酵母Δ12和Δ15双功能脂肪酸去饱和酶基因及其克隆方法

摘要

本发明涉及一个来源于橘林油脂酵母(Lipomyces kononenkoae)的具有Δ12/Δ15双功能的脂肪酸去饱和酶基因及其克隆方法。本发明分别以橘林油脂酵母(Lipomyces kononenkoae)为材料，通过设计简并引物扩增基因核心序列，再采用基因组步移的方法扩增出全长Δ15-脂肪酸去饱和酶基因lkfad15；通过在酿酒酵母INVScI中异源表达lkfad15证明该去饱和酶具有Δ12，15-脂肪酸去饱和酶的双功能，并且对C16和C18底物都具有较高的底物特异性。

主权项

油脂酵母Δ12和Δ15双功能脂肪酸去饱和酶基因，其特征在于它的基因的全长序列如下：atgtcagtcg ttgactttac cgataccaca agtggctcgg ctatcaattc ttcgaacatt     60tcccagagag gaaatggatc tacgatagtc gaaaccaaaa aagggccatc ttcaaatttg    120aaggctattg acacgtttgg taacgagttc aaagtaccag attacaccat taagcaaatt    180ttgtcggcta tcccaaagca ttgttatgaa agatctcttg ttagatcgtt aggctacgtt    240gctcgtgata taaccatgat gtgtttaatt ggttacattg gacaaaagac tatcccaatg    300gttgagatcg caggcaagga agggttgagt agtaacatca gaggaggcct ctggtgcgtg    360tattcatact tgttggggtt atttggtttt ggtttatgga ttttagctca cgaatgtgga    420cacggggcat tttctgatta tcagaatgtt aatgatgttg ttggttggat tttacactcg    480tatttgatag tcccatattt ttcgtggaaa ttctctcatt caaagcatca caaggctact    540ggccacttga ctaaggatat ggttttcatt ccttacacca aggaagaatt tgtcgaaaag    600agcggcgtat ctaaggtgtc tgaagtcatg gaagattcgc caatctggtc gttgatggtt    660ttgattttcc aacaaattgg tggtttacaa ttgtatttag ctactaatgc cactggtcaa    720tcatacctag gtcactcaaa gatcgccaag tctcattatg ctccagcttc tccagttttt    780gacaaggaac actactggta tattatcttg tctgacatcg ggattattac aaccataacg    840gttgtgtacc aatggtacaa gaactttggt ttcttcaaca tgtttgtcaa ctggttcatg    900ccttggttat gggttaacca ctggttagtc tttgttactt tcttacaaca taccgatcca    960accatgcctc attaccgtga taatgaatgg actttcgctc gtggtgctgc tgctactatc   1020gaccgtaact ttggtttcat cggacaacac attttccatg atatcattga aactcacgtt   1080ttgcaccatt acgtttcaag aataccattt tacaatgcta gagaagccac cgatgccatc   1140agaaaggtta tgggcgaaca ttatagatat gaaggtgaat ctatgtggta ttctttatgg   1200aaatgtatga gaatgtgtca atatgttgat gatgctgaca ctgacgccaa aggtgtttta   1260atgtacagaa acgttaacgg tgcaggtcca gttaagccaa tagattaa                1308。