[发明专利]一种实时荧光定量RT-PCR鉴别猪瘟强毒与疫苗弱毒的方法

摘要

本发明涉及一种实时荧光定量RT-PCR反应结合熔解曲线分析鉴别猪瘟强毒与疫苗弱毒的方法。设计合成了3条引物，P1/P3可特异性扩增猪瘟病毒强毒株，预期扩增产物为549bp，Tm值为89.5±0.5℃；P2/P3可特异性扩增猪瘟兔化弱毒疫苗株，预期扩增产物为164bp，Tm值为84.5±0.5℃。在最优条件下进行荧光定量RT-PCR反应和复合荧光定量RT-PCR反应，最终成功建立了能够鉴别区分猪瘟野毒与疫苗毒的荧光定量RT-PCR方法。不仅可以根据熔解曲线波峰的多少确定是否有非特异性PCR产物，还可根据波峰峰顶对应的温度进一步确定产物的特异性。本方法可以根据熔解曲线立即判断发病猪是强毒或者弱毒疫苗感染，减少了未感染免疫猪被误杀的可能性，具有很高的科研与临床应用价值。

主权项

一种能够鉴别猪瘟强毒和弱毒疫苗的反转录‑复合套式聚合酶链式反应(RT‑nPCR)的诊断方法，其特征是设计合成3条引物：P1(5′‑TTGGCATCATTGCATAAGGG‑3′)为猪瘟强毒特异上游引物，P2(5′‑GTGGTCTACACAGGGGGGGT‑3′)为猪瘟兔化弱毒疫苗株特异上游引物，P3(5′‑GATTACAACGCCATCTCTGTTACA‑3′)为猪瘟病毒共用下游引物；P1/P3可特异性扩增猪瘟病毒强毒株，预期扩增产物为549bp，Tm值为89.5±0.5℃；P2/P3可特异性扩增猪瘟兔化弱毒疫苗株，预期扩增产物为164bp，Tm值为84.5±0.5℃；然后提取病毒总RNA进行常规RT‑PCR反应。