[发明专利]一种基于主效QTL连锁标记的大白菜低硝酸盐含量检测方法

摘要

本发明提供一种应用分子标记进行硝酸盐含量鉴定、不受环境条件影响、减少育种工作量、提高选择准确性和育种效率的基于主效QTL连锁标记的大白菜低硝酸盐含量检测方法，步骤包括对大白菜植株的叶片分离提取获得DNA，采用PCR引物TCTGCCTCTGCTCAAAGT和GCTGAAACATCCCACGACT进行PCR扩增，获得大小为300bp的分子标记E18-300；将E18-300用于大白菜品种A62-2-1及其衍生品种或品系的基因型检测。本发明利用与A62-2-1低硝酸盐含量主效QTL紧密连锁分子E18-300，可以不受环境的影响，对特定的的低硝酸盐材料的后代及衍生品种或品系在早代苗期进行筛选，节约成本，提高育种和选择效率。

主权项

一种基于主效QTL连锁标记的大白菜低硝酸盐含量检测方法，其特征在于：步骤如下：步骤一：对A62‑2‑1大白菜植株的叶片分离提取获得DNA，用大白菜品种A62‑2‑1的DNA，采用PCR引物TGGGAATCTCCTTTAGCAC和ACAAATCCAGGTCTCATCG进行PCR扩增，扩增产物在6％聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离后，获得大小为300bp的分子标记E18‑300；所述6％聚丙烯酰胺凝胶，是指100ml聚丙烯酰胺凝胶溶液中含有5.7克丙烯酰胺和0.3克甲叉双丙烯酰胺；步骤二：将E18‑300用于大白菜品种A62‑2‑1及其衍生品种或品系的基因型检测，以判断该品种或品系硝酸盐含量；所述大白菜品种A62‑2‑1衍生品种或品系是指以A62‑2‑1为亲本，通过常规杂交、或采用组织培养、花药培养、花粉培养、游离小孢子培养、遗传转化、物理诱变和化学化学诱变方法获得的大白菜品种或品系，或采用花药培养、花粉培养、游离小孢子培养获得单倍体，再用秋水仙素处理获得双单倍体；步骤三：判断如步骤二所述的大白菜品种A62‑2‑1衍生品种或品系的硝酸盐含量的方法是：将大白菜品种A62‑2‑1及其衍生品种或品系为母本或父本与其他大白菜品种杂交并繁衍至F2以上，对大白菜植株的叶片分离提取获得DNA，然后用E18‑300的PCR引物TGGGAATCTCCTTTAGCAC和ACAAATCCAGGTCTCATCG对这些DNA进行PCR扩增，判断是否具有大白菜品种A62‑2‑1的低硝酸盐含量主效QTL紧密连锁的分子标记E18‑300，来预测该品种或品系硝酸盐含量；只有PCR扩增产物出现唯一一条300bp的E18‑300时，则预测该品种或品系具有低硝酸盐含量；PCR扩增产物出现唯一一条290bp的E18‑290时，则预测该品种或品系具有高硝酸盐含量；PCR扩增产物同时出现300bp和290bp的E18‑300和E18‑290时，则预测该品种或品系具有中等硝酸盐含量；所述的低硝酸盐含量是指大白菜硝酸盐含量低于300mg/kg鲜样，所述的中等硝酸盐含量是指大白菜硝酸盐含量介于300mg/kg鲜样到400mg/kg鲜样之间，所述的高硝酸盐含量是指大白菜硝酸盐含量在400mg/kg鲜样以上。