[发明专利]抗沙门氏菌口服疫苗的制备工艺

摘要

一种抗沙门氏菌口服疫苗的制备工艺，首先构建表达沙门菌SEF14和SEF21菌毛抗原的大肠杆菌，再通过蛋白纯化技术将菌毛抗原提纯。将二棕榈酰磷脂酰胆碱，二棕榈酰磷脂酰丝氨酸和胆固醇溶解在有机溶剂充分混合。将混合的脂类干燥，在混合脂质膜内加入一定量的SEF14和SEF21抗原，充分混合，接着进行脂质膜涡旋式分散，获得口服疫苗。本发明大大提高了沙门菌抗原的纯度，使生产制备工艺稳定、简单、可控，收率高，纯度高，本发明可有效抵抗酸性环境及机体酶系统的破坏作用，使生产的SEF14和SEF21菌毛蛋白抗原可以通过口服方式给药；而且，本发明完全减毒，高免疫原性，对环境不造成污染。

主权项

一种抗沙门氏菌口服疫苗的制备工艺，其特征在于，包括如下步骤：S1、构建表达沙门菌SEF14和SEF21菌毛抗原的大肠杆菌，具体分步如下：S11、分别将含有SEF14、SEF21菌毛抗原基因序列的DNA片段与pET20b(+)载体连接，然后分别对连接的片段进行扩增，此时原核表达载体pET20b(+)‑SEF14以及pET20b(+)‑SEF21两种质粒分别构建成功；S12、分别将两种所述质粒转化到BL21(DE3)表达菌株中；S13、经IPTG诱导1‑2小时后，收集菌体，超声波打碎、离心获得包涵体后，利用镍柱子层析纯化；S14、分别利用纯化的原核表达SEF14、SEF21蛋白制备兔抗SEF14、SEF21多克隆抗体；S2、制备脂质体包裹的SEF14和SEF21抗原，具体分步如下：S21、将二棕榈酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、胆固醇按1∶1∶2的比例充分混合；S22、将混合的脂类干燥，制成脂质体混合物；S23、将所述混合物与所述SEF14、SEF21按照质量比2‑3∶1∶1的比例充分混合；S24、在1600rpm强度下进行脂质膜涡旋式分散，获得的脂质体包裹SEF14和SEF21口服疫苗。