[发明专利]抗沙门氏菌口服疫苗的制备工艺

说明书

技术领域

本发明涉及一种生物技术制药领域，更具体地说，涉及沙门氏菌口服疫苗的制备。

背景技术

据联合国粮食及农业组织和世界卫生组织对国际食品安全的调查结果表示，近几十年来，许多国家的食物传染疾病食源性疾病的发生率一直在上升，其与食物中微生物引起的疾病增多有关。世界各国细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的常列榜首。沙门氏菌病是一种人畜共患病，禽肉禽蛋是主要传播媒介，其特征是腹泻、发热、腹痛或痉孪、呕吐、头痛和恶心，严重时导致死亡。死亡病例多见于易感染人群，包括婴儿、老人和免疫系统缺损者。自二十世纪七十年代以来，南、北美洲和欧洲各国报告沙门氏菌肠炎发病率有了大幅度的提高。美国疾病预防和控制中心(CDC)估计美国的沙门氏菌发病率为每年1500000例，给美国人在医疗费用和生产率方面造成的损失估计每年高达23.29亿美元(以1998年美元计算)。CDC说，美国的沙门氏菌病肆虐42个州，引起上千人患病，其中毒事件与被沙门氏菌污染的鸡蛋有关，全美紧急召回数亿鸡蛋。

沙门氏菌(Salmonella)是一种革氏阴性杆菌，共有A，B，C1，C2，D，E1-E4，F，G，H，I等血清群。其血清型则很复杂，已确知有2000多种以上，其中最为普遍的是肠炎沙门氏菌。肠炎沙门氏菌是导致人类细菌性肠胃炎最常见的病原体(40-60％)。肠炎沙门氏菌感染的第一步是粘附于宿主肠粘膜上皮细胞表面，其过程是由沙门氏菌菌毛所介导的。目前，所报道的肠炎沙门氏菌菌毛有SEF14、SEF21、SEF17、SEF18、LPF、PEF和BFP。其中SEF14和SEF21在病原菌在粘膜上皮细胞粘附以及侵染过程中起关键作用。开发靶标为SEF14和SEF21抗体，可以抑制肠炎沙门氏菌菌毛与肠管粘膜中的糖脂质受体的结合，进而达到防治肠炎沙门氏菌感染的目的。

脂质体是由类脂质组成的人造细胞膜样小球体，主要由磷酸类脂、胆固醇、硬脂胺等组成的单层或多层双分子结构。脂质体既无毒性，又无免疫原性，并且在体内有可降解性，是目前最有希望成为理想的粘膜免疫佐剂之一。因脂质体因具有双层膜的保护，其与蛋白质抗原结合后，使蛋白质抗原稳定性更高，抗原不容易被胃酸以及蛋白酶所降解；脂质体能够定位于组织-粘膜相关样淋巴组织(MALT)中的M细胞(membraneous epithelial cell)激活T细胞及B细胞，并有效地引入细胞内增强机体的体液和细胞介导免疫应答；可减少抗原的剂量及接种次数；包裹有抗原的脂质体能被储存于巨噬细胞中缓慢释放，从而使机体长时间保持高效价抗体，延长疫苗使用期。因此，本专利采用脂质体包裹SEF14和SEF21抗原疫苗，有效保护SEF14和SEF21不被降解，使其在增强抗原性的基础上还可以用于口服。

随着该沙门氏菌污染的发展，国内外针对沙门氏菌疫苗市场销售金额和销售数量呈明显上升趋势，有着最为广泛的临床需求基础。我国由于缺乏具有自主知识产权的沙门氏菌疫苗，所用的疫苗均是外国进口疫苗，跨国医药公司纷纷进入中国，对我国沙门氏菌疫苗的自主创新造成了巨大的冲击。

申请者研发的脂质体包裹SEF14和SEF21疫苗对沙门氏菌预防具有潜在的应用价值。在前期研究的基础上，并按照我国SFDA颁布的相关法规和要求，改进工艺，提高其表达水平和纯化得率。同时建立了质量标准，补充了相应的临床前药理毒理研究资料。将脂质体包裹SEF14和SEF21疫苗开发成具有自主知识产权的新型沙门氏菌疫苗并推向产业化，造福全人类，具有极大的社会意义和广泛的市场意义。

目前，有关沙门菌疫苗的专利及制备研究的文章及专利如下：

(1)一种抗沙门菌单链抗体与跨膜蛋白融合蛋白的制备方法(专利公开号：200710305386.7)

本发明涉及一种用于制备抗沙门菌属O抗原单链抗体和跨膜蛋白的融合蛋白的方法。本发明还涉及包含所述融合基因的表达型重组体、包含所述表达型重组体的工程菌、由此工程菌表达和分离纯化的目的融合蛋白scFvLH-pVIII(和scFvHL-pVIII)以及此融合蛋白用于沙门菌属的临床检验诊断以及食品卫生诊断。

(2)一种快速检测沙门菌的方法(专利公开号：200810046809.2)