[发明专利]一种透明质酸的制备方法

摘要

本发明是一种生产透明质酸的方法。该方法是通过构建透明质酸合成酶基因Has和尿苷二磷酸葡萄糖脱氢酶基因在大肠杆菌中共表达的重组表达载体，将该重组表达载体转化大肠杆菌获得工程大肠杆菌，发酵该工程大肠杆菌得到透明质酸。该方法提高生产透明质酸的产量达到2.5g/L,比现有技术通过大肠杆菌中表达革兰氏阳性链锁状球菌HA合成基因spHas获得的最高HA产量提高近10倍。

主权项

一种透明质酸的制备方法，其特征在于用工程大肠杆菌pHK/JM109生产透明质酸的摇瓶培养合成按以下进行： 在500ml‑2500ml 三角瓶中，以总体积100ml‑500ml 含25‑50 mM K2HPO4•3H2O, pH6.5‑7.2，2‑4mM g/L MgSO4•7H2O, 20‑40 mM/L 柠檬酸, 1‑2 mM MnCl2, 300‑400 mM 葡萄糖50‑75 mM 氮乙酰葡萄糖胺,5‑10 mM 乳糖、10‑30 g/L 甘油、3‑5g/L酪蛋白酸水解物( Casamino acid)的体系中加入已表达pmHas和kfiD的pHK/JM109，使菌体细胞浓度达4‑5% W/V, 发酵条件为30‑33 ℃，250 rpm，并用28% V/V的氨水调节pH至中性，发酵反应时间为30‑36小时。