[发明专利]用于PCR的试剂和方法

摘要

本发明涉及修饰的双链寡核苷酸，其在每个链上具有末端区，具有6-50个核苷酸长的杂交物长度，具有至少32℃的解链温度Tm，并且包括2-4个修饰基团，每个修饰基团共价连接到不同末端区，优选连接到末端核苷酸，所述修饰基团为不具有非平面大体积部分的多环取代基，所述修饰的寡核苷酸能够结合到DNA聚合酶的5’核酸外切酶域，并且当以通常不高于2000nM的浓度包括在PCR或其它引物依赖性DNA扩增反应中时，该浓度对于以下功能的至少一个是有效的：抑制引导错误、增加聚合酶对3’端错配的选择性、增加聚合酶对富含AT 3’端的选择性、减少重复间发散、抑制聚合酶5’核酸外切酶活性和抑制聚合酶活性；以及包含此类修饰的双链寡核苷酸的扩增反应混合物，和包括此类修饰的双链寡核苷酸的扩增反应、扩增测定和试剂盒。

主权项

一种用于引物依赖性DNA扩增反应的反应混合物，所述扩增反应包括通过用于扩增至少一个DNA靶序列的DNA聚合酶来引物延伸，所述反应混合物包括至少一个引物对、DNA聚合酶和dNTP，改良处包括：在扩增起始前将至少一个双链寡核苷酸添加物包括在反应混合物内，该双链寡核苷酸添加物具有6‑50个核苷酸长的杂交物长度，在32℃下至少50％为双链，在其每条链上具有末端区并且包括1‑4个修饰基团，每个修饰基团均共价连接到不同末端区，所述修饰基团为不具有非平面大体积部分的多环部分，其中所包括的所述至少一个双链寡核苷酸添加物的浓度与所述DNA聚合酶浓度有关并且对于以下功能的至少一个是有效的：抑制引导错误、提高聚合酶对具有未完全互补的3’凹端序列的杂交物的选择性、提高聚合酶对具有富含AT的3’凹端序列的杂交物的选择性、减少重复反应间的发散、抑制聚合酶5’核酸外切酶活性、以及抑制聚合酶活性；条件是，如果添加物为任何靶序列的引物或检测探针，则其包括至少三个修饰基团。