[发明专利]蓝耳病RT-LAMP检测方法及检测试剂盒

摘要

本发明公开了一种简便、快速、特异的蓝耳病RT-PCR检测方法及检测试剂盒。本发明应用反转录环介导等温扩增技术（RT-LAMP），在PRRSV核衣壳蛋白（N蛋白）ORF7基因保守序列的6个区域设计2对特异引物，经反应体系、反应条件优化及敏感性和特异性试验，建立了蓝耳病病毒（PRRSV）RT-LAMP检测方法。研究结果表明，该检测方法不需要复杂仪器，仅用一台普通恒温水浴锅，在等温条件(63℃)保温1h，即可完成核酸扩增反应，加入核酸染料SYBRGreenⅠ后，用肉眼即可对试验结果进行准确判定，为野外、现场和基层部门蓝耳病的检测提供了一种廉价、简便、快速、敏感性高、特异性好的新方法。

主权项

一种蓝耳病RT‑LAMP检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A：取待检样品提取核酸，进行反转录以得到cDNA；B：以所述cDNA为模板，用外引物（B3、F3）和内引物（FIP、BIP）在反应体系中进行恒温扩增；所述外引物（B3、F3）和内引物（FIP、BIP）的序列分别如下：B3：5’‑ATGCTGAGGGTGATGCTGT‑3’F3：5’‑CATTTCCCTCTAGCGACTGA‑3’FIP：5’‑GCCCTGATTGAAGGCAGTCTGGACTTTACCCCTAGTGAGCGG‑3’BIP：5’‑ACCCTGTCAGATTCAGGGAGGATCAGACGCACAGTATGTTGC‑3’；C：在扩增产物中加入显色剂根据颜色变化来判定结果；或者取扩增产物用琼脂糖电泳检测方法来判定结果。