[发明专利]一种氯霉素单克隆抗体的制备方法无效
申请号: | 201010561726.4 | 申请日: | 2010-11-26 |
公开(公告)号: | CN102477097A | 公开(公告)日: | 2012-05-30 |
发明(设计)人: | 应国清;汪竹环;易喻;陈建澍;梅建凤;王鸿 | 申请(专利权)人: | 浙江工业大学;杭州博林生物技术有限公司 |
主分类号: | C07K16/44 | 分类号: | C07K16/44;C12N5/20;C12R1/91 |
代理公司: | 浙江杭州金通专利事务所有限公司 33100 | 代理人: | 徐关寿 |
地址: | 310014 浙*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | 本发明公开了一种氯霉素(CAP)单克隆抗体的制备方法,包括以下步骤:(1)用重氮化方法制备CAP-BSA的抗原;(2)用CAP-BSA抗原淋巴免疫小鼠,第一次免疫与弗氏完全佐剂充分乳化,第二次和第三次免疫与弗氏不完全佐剂充分乳化,每次间隔7天,融合前三天腹腔直接注射抗原加强免疫;(3)用酶联免疫吸附法测小鼠血清效价;(4)选择血清效价最高的小鼠取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合;(5)选择性培养基培养筛选融合细胞,检测筛选阳性细胞,克隆化培养,进一步克隆筛选阳性细胞,阳性克隆扩培与冻存;(6)将扩大培养后的细胞株注射入小鼠腹腔以生产大量腹水;(7)用层析柱纯化腹水中的抗氯霉素单克隆抗体。制备得到的抗CAP-BSA单克隆抗体灵敏性高、特异性强、实用性好。 | ||
搜索关键词: | 一种 氯霉素 单克隆抗体 制备 方法 | ||
【主权项】:
一种抗氯霉素单克隆抗体的制备方法,其特征在于包括以下步骤:(1) 用重氮化方法制备CAP‑BSA的抗原;(2)免疫:用CAP‑BSA抗原淋巴免疫小鼠,第一次免疫与弗氏完全佐剂充分乳化,第二次和第三次免疫与弗氏不完全佐剂充分乳化,每次间隔7天,融合前三天腹腔直接注射抗原加强免疫;(3)筛选:用酶联免疫吸附法测小鼠血清效价;(4)细胞融合:选择血清效价最高的小鼠取脾细胞与骨髓瘤细胞体外融合;(5)选择性培养基培养筛选融合细胞,检测筛选阳性细胞,克隆化培养,进一步克隆筛选阳性细胞,阳性克隆扩培与冻存;(6)腹水制备:将扩大培养后的细胞株注射入小鼠腹腔以生产大量腹水;(7)腹水纯化:用层析柱纯化腹水中的抗氯霉素单克隆抗体。
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