[发明专利]土壤微生物数量精确测定的方法

摘要

本发明公开了一种土壤可培养微生物数量精确测定的方法，其步骤是：（1）土壤前处理：去除土壤样品中的植物残体和动物以及小石子，再将土壤样品混合均匀；（2）测定土壤含水量：先将铝盒放在烘箱中烘干，取出铝盒置于下部放有部分干燥硅胶的干燥器中冷却至室温，称量烘干土壤+铝盒的重量；（3）土壤悬浮液制备：称取烘干重的新鲜土壤样品，置于经灭菌的杯中，得到土壤悬浮液；（4）土壤悬浮液稀释：用经灭菌的电动移液器稀释法土壤悬浮液依次稀释；（5）培养基配制；（6）接种与培养；（7）计数与计算。该方法操作简便、快速，测定结果精密度和准确度高、重复性好，适合于大批量土壤样品的各种可培养微生物数量的精确测定。

主权项

一种土壤微生物数量精确测定的方法，其步骤是：（1）土壤前处理：去除土壤样品中的植物残体和动物以及小石子，再将土壤样品混合均匀；（2）测定土壤含水量：先将铝盒放在烘箱中于103℃下烘干8–10小时，取出铝盒置于下部放有部分干燥硅胶的干燥器中冷却至室温，称量铝盒重量，取10–20克新鲜土壤样品放入上述烘干后的铝盒中，称量新鲜土壤+铝盒的重量，将其放入烘箱中在103℃下烘干20–24小时，取出置于上述干燥器中冷却至室温，然后称量烘干土壤+铝盒的重量，采样下列公式计算土壤含水量：土壤含水量%= 新鲜土壤+铝盒g– 铝盒g/ 烘干土壤+铝盒g– 铝盒g´ 100%；（3）土壤悬浮液制备：称取10克烘干重的上述新鲜土壤样品，置于经灭菌的250–325毫升乐扣杯中，再加入经灭菌的直径为0.5厘米的玻璃珠5–7粒，然后加入无菌水，使加入的无菌水与土壤中水之和为90毫升，将装有土壤悬浮液的乐扣杯置于振荡器中震荡，使土壤分散，即得到10‑1土壤悬浮液；（4）土壤悬浮液稀释：用经灭菌的电动移液器按10倍稀释法将上述土壤悬浮液依次稀释成10‑2–10‑6土壤悬浮液；（5）培养基配制：分别配置土壤可培养细菌培养基和土壤可培养真菌培养基，将培养基在121℃下灭菌30分钟，冷却至40‑50℃后，在细菌培养基中加入真菌抑制剂，真菌培养基中加入细菌抑制剂，然后将培养基倒入培养皿中制备平板培养基；（6）接种与培养：用经灭菌的电动移液器分别取上述10‑3–10‑6土壤悬浮液0.1毫升，置于土壤可培养细菌培养基或土壤可培养真菌培养基中，每个稀释度重复3–4次，用经酒精灯火焰灭菌的刮铲将培养基表面悬浮液涂抹均匀，置于25–30℃下培养2–4天；（7）计数与计算：选择培养皿中生长的菌落数为20–100个菌落的稀释度进行计数，采用下列公式计算土壤可培养细菌或真菌：土壤可培养细菌或土壤可培养真菌（cfu/克）=（菌落平均数 ´ 稀释倍数 ´ 10）/ 土样烘干质量；其中，“10”为换算系数，即将0.1毫升悬土壤浮液换算为1.0毫升。