[发明专利]一种检测PCA3基因、PSA基因的液相芯片法及其诊断试剂盒

摘要

本发明公开了一种检测PCA3基因、PSA基因的液相芯片法及诊断试剂盒，通过对PCA3基因的mRNA和/或PSA基因的mRNA设计引物和探针，将探针与微球共价结合形成的探针微球混合物，与逆转录PCR扩增产物杂交，加入链霉亲和素藻红蛋白后，可检测出不同微球的荧光信号，从而确定待检测样品中是否含有PCA3、PSA基因以及它们的表达状况，同时亦可得出PCA3/PSA比值。本发明所述的方法及试剂盒具有高灵敏度、高通量性、检测快速、准确等优点，能够对不同程度的前列腺疾病包括前列腺癌和良性前列腺增生相关的PCA3、PSA基因同时进行定性和定量检测，并对前列腺癌进行特异性诊断。

主权项

一种检测PCA3基因、PSA基因的液相芯片法，其特征在于，包括以下步骤：(1)设计一种羧基微球Beads，该微球上共价结合针对PCA3基因或PSA基因的mRNA所设计的特异性核酸探针；或者设计包含两种不同荧光编码的羧基微球Beads，每种微球上分别共价结合针对PCA3基因和PSA基因的mRNA所设计的特异性核酸探针；(2)针对PCA3基因和/或PSA基因的mRNA，分别设计上下游引物，通过逆转录PCR扩增出相应的产物；(3)含有特异性核酸探针的微球与PCA3基因和/或PSA基因的mRNA的逆转录扩增产物混合杂交，加入链霉亲和素‑藻红蛋白Streptavidin‑PE后，通过液相芯片xMAP方法检测荧光信号；(4)将检测到的荧光信号与内参基因的荧光信号进行比较，从而确定检测样品中是否存在前列腺疾病相关的基因PCA3基因和/或PSA基因，及其在样品中的表达状况，同时亦可计算出PCA3基因/PSA基因的比值。