[发明专利]一种检测PCA3基因、PSA基因的液相芯片法及其诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断检测技术领域，具体涉及前列腺疾病相关的特异基因PCA3、PSA的液相芯片检测方法及其诊断试剂盒。

背景技术

PCA3(prostate cancer antigen 3)基因，又称DD3(differential display code 3)基因，是1999年Bussemakers等发现的一种功能为非编码RNA的基因，由4个外显子和3个内含子组成。PCA3基因仅表达于前列腺组织，在正常前列腺和良性前列腺增生(BPH)组织中其表达极低或不表达，而在前列腺癌(PCa)细胞中呈高表达。因此，PCA3基因目前被认为是前列腺癌最特异的基因。

前列腺特异性抗原(PSA，prostate specific antigen)目前虽然已被广泛应用于前列腺癌的普查、诊断、分期、疗效观察和预后判断，但PSA基因不具有肿瘤特异性，在前列腺增生(BPH)和前列腺炎等良性病变中也可升高，而且PSA基因并不能提高前列腺癌的早期诊断率。

前列腺穿刺活检是不同的前列腺疾病鉴别诊断的金标准，但其是有创检查，且常有假阴性的发生。直肠指诊及相关辅助检查如B超、MRI(核磁共振成像)等虽为非侵入性，但都有局限性。因此，寻找更加特异、早期、无创的检测手段是前列腺疾病鉴别诊断的必然趋势。

当前国内外广泛使用的分子生物学检测前列腺疾病相关的特异性基因的方法中，荧光定量PCR存在着检测通量的局限性，所以都还不能真正满足临床诊断检测的需要。传统的固相生物芯片(Biochip)技术存在着可重复性差、灵敏度不够好以及操作繁琐的突出弱点。因此临床上需要有一种检测方法，能够迅速、稳定、准确地对前列腺疾病相关的特异基因进行联合检测，液相芯片(xMAP)技术正是这样一种新型检测技术。

液相芯片能够对少量样本进行定性、定量检测，具有高通量、操作简便、重复性好、灵敏度高、线性范围宽等突出优点。该系统是由许多微球为主要基质构成的，在微球的制造过程当中，掺入了两种不同的红色分类荧光，根据这两种荧光的比例不同，把球形基质分为100种，可以标记上100种不同的探针分子，能同时对一个样品中多达100种不同的目标分子进行检测。根据检测物的不同，微球表面可以共价结合各种各样的核酸检测探针，在杂交反应进行时再加上荧光标记。在同一反应体系中可以同时加入不同的检测微球，这样就可以利用少量的样本进行快速、高通量的检测。反应结束后，通过微流体技术将微球排成单列快速流经液相芯片检测仪，每个微球可同时被两束激光检测到，红色激光激发微球上的红色分类荧光，将各个不同的反应区分开来而定性；绿色激光则激发结合在待测样本上的荧光标记进行定量。当标记好的待测样本与特定微球上的探针结合在一起时，两束激光所激发的光均可被检测到。最后，通过计算机的高速数字信号处理器，可以自动统计分析得出特定微球上的平均荧光强度，从而确定检测物的种类和数量。

本发明基于液相芯片技术的高通量、操作简便、重复性好、灵敏度高、线性范围宽等突出优点，对前列腺疾病相关的特异基因进行检测，能够在临床检测上得到更好的应用。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是提供一种前列腺疾病相关的特异基因的检测方法及诊断试剂盒。该方法及试剂盒包含对PCA3基因和/或PSA基因进行检测，可以对不同程度的前列腺疾病，尤其是前列腺癌进行特异和早期诊断、分期、疗效观察和预后判断，对良性前列腺增生和前列腺癌进行鉴别诊断，以及对其他相关疾病进行早期诊断、疗效观察和预后判断。本检测方法及诊断试剂盒具有高灵敏度、高特异性、高准确度、检测迅速等优点。

为解决上述技术问题，在本发明的一方面，提供一种检测前列腺疾病相关的特异基因PCA3基因、PSA基因以及PCA3基因/PSA基因的比值的液相芯片方法，包括以下步骤：

(1)设计一种羧基微球Beads，该微球上共价结合针对PCA3基因或PSA基因的mRNA所设计的特异性核酸探针；或者设计包含两种不同荧光编码的羧基微球Beads，每种微球上分别共价结合针对PCA3基因和基因PSA的mRNA所设计的特异性核酸探针；所述的PCA3基因可以单独作为前列腺癌的特异基因进行检测，PSA基因可以单独作为相关的前列腺疾病的特异基因进行检测，PCA3和PSA基因可以组合起来作为相关前列腺疾病的特异性基因进行联合检测，同时还可以根据PCA3基因/PSA基因的比值对相关的前列腺疾病进行鉴别诊断。PCA3基因和/或PSA基因也可以与其它基因组合起来作为相关前列腺疾病的特异性基因进行联合检测；