[发明专利]一种提高番茄类胡萝卜素含量的方法

摘要

本发明公开了一种提高番茄类胡萝卜素含量的方法，是利用基因工程手段构建隐花色素基因1、隐花色素基因1的羧基端和隐花色素基因2的羧基端的过量表达载体，转化番茄，获得转基因番茄。本发明方法实现了转基因番茄果实中番茄红素及总的类胡萝卜素的含量较大幅度的提高，最大可分别提高3.6倍和3.4倍，使得从番茄中提取天然的番茄红素等将更加高效，大大提高了番茄产品的附加值。

主权项

一种提高番茄类胡萝卜素含量的方法，步骤包括(1)构建隐花色素基因1(cry1)、隐花色素基因1羧基端(GUS::CCT1)和隐花色素基因2羧基端(GUS::CCT2)的过量表达载体；(2)植物的转化；(3)转基因番茄果实的获得；(4)转基因番茄的PCR检测和Western Blot验证；(5)转基因番茄果实中类胡萝卜素含量的测定；其特征是：所述构建隐花色素基因1(GFP::CRY1)、隐花色素基因1羧基端(GUS::CCT1)和隐花色素基因2羧基端(GUS::CCT2)的过量表达载体的方法是：通过花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子构建cry1基因和绿色荧光蛋白标签(GFP tag)的过量表达载体GFP::CRY1；通过花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子和β‑葡糖醛酸糖苷酶(GUS)构建cry1基因羧基端和cry2基因羧基端的GUS::CCT1和GUS::CCT2过量表达载体；其中，所述cry1基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；所述cry1基因羧基端(CCT1)的核苷酸序列如SEQID No.2所示；所述cry2基因羧基端(CCT2)的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述植物的转化是：将带有目的基因的植物表达载体(GFP::CRY1)、(GUS::CCT1)和(GUS::CCT2)通过农杆菌侵染的方法转化番茄植株；所述转基因番茄果实的获得是：收获第二代的转基因番茄纯合体的果实；所述转基因番茄的Western Blot验证方法是：用CRY1和CRY2的抗体作为一抗，用碱性磷酸酶作为二抗的免疫印迹杂交检测；所述转基因番茄果实中类胡萝卜素含量的测定方法是：将获得的转基因番茄种子研磨，经过丙酮石油醚提取液反复提取，无水硫酸钠脱水，乙酸乙酯溶解步骤后，用高效液相色谱(HPLC)测定其中类胡萝卜素的含量。