[发明专利]融合蛋白一步催化制备N-乙酰神经氨酸的方法无效
| 申请号： | 201010282400.8 | 申请日： | 2010-09-10 |
| 公开（公告）号： | CN101979644A | 公开（公告）日： | 2011-02-23 |
| 发明（设计）人： | 梅松 | 申请（专利权）人： | 扬州博生源生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12P19/26 | 分类号： | C12P19/26;C12N15/60;C12N15/61;C12N15/81;C12N9/00;C12N9/88;C12N9/90 |
| 代理公司： | 扬州苏中专利事务所(普通合伙) 32222 | 代理人： | 许必元 |
| 地址： | 225200 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明公开了融合蛋白一步催化制备N-乙酰神经氨酸的方法，属于生物工程技术领域。利用重叠PCR技术，将N-乙酰葡萄糖胺-2-差向异构酶和N-乙酰神经氨酸醛缩酶的基因连在一起，导入毕赤酵母宿主细胞中，从而获得具有活性的融合蛋白，该融合蛋白在反应器中催化N-乙酰葡萄糖胺和丙酮酸及其盐转化生成N-乙酰神经氨酸。本发明通过重叠PCR技术将两个酶融合，一步催化制备N-乙酰神经氨酸，显著简化了生产工艺流程和降低生产成本。由于融合蛋白中两酶的活性中心位点邻近，使得酶促反应的效率得到了极大的提高。本发明总的转化效率达到了60％以上，并且能在30h内完成催化反应，该方法操作简便，对N-乙酰神经氨酸在工业大规模生产上有较大意义。 | ||
| 搜索关键词： | 融合 蛋白 一步 催化 制备 乙酰 神经 氨酸 方法 | ||
【主权项】：
融合蛋白一步催化制备N‑乙酰神经氨酸的方法，其特征是包括以下步骤：(1)利用重叠PCR技术，将N‑乙酰葡萄糖胺‑2‑差向异构酶和N‑乙酰神经氨酸醛缩酶的基因连在一起，导入毕赤酵母宿主细胞中，从而获得具有N‑乙酰葡萄糖胺‑2‑差向异构酶和N‑乙酰神经氨酸异构酶活性的融合蛋白；(2)催化反应体系的pH为6.5‑8.0，反应温度为30‑40℃，N‑乙酰葡萄糖胺与丙酮酸及其盐的重量比为1‑1.8，将N‑乙酰葡萄糖胺和丙酮酸及其盐与游离的融合酶蛋白或者固定化的融合蛋白混匀，反应得到混合物；(3)从反应混合物分离制备N‑乙酰神经氨酸。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于扬州博生源生物科技有限公司，未经扬州博生源生物科技有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/201010282400.8/，转载请声明来源钻瓜专利网。
