[发明专利]一种从猪血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法

摘要

该发明公开了一种从猪血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，该方法采用分离、清洗、破碎一步分离法与分离血浆与血球并得到溶血液，经乙醇-氯仿溶解沉淀法得到粗酶液，再经丙酮沉淀法沉淀得到SOD的粗蛋白，对上清液热变性，取上清弃去沉淀，采用螺旋梯度洗脱技术对上清液进行进一步的分离与纯化提高单位酶活，得到纯化的SOD酶液，经过膜过滤除盐，最后进行冷冻干燥，达到纯化的SOD的产品，简化了生产工艺和设备，适合工业化大规模生产的要求。

主权项

一种从猪血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：依照如下步骤进行：(1)向猪血中加入抗凝剂，离心3000rpm离心10～30min去血浆，收集红细胞；然后加入红细胞体积3～5倍的0.9％NaCl溶液进行清洗，离心4000rpm离心10～30min，弃去上清液后，收集红细胞并加入红细胞体积1～3倍体积的去离子水，0～4℃水浴下静置10‑15h后得到溶血液；(2)向溶血液中缓慢加入4℃以下冷预过的95％乙醇后，再缓慢加入预冷过的的氯仿，然后搅拌、静置、离心后收集上清液获得粗酶液；(3)向粗酶液中加入丙酮，然后搅拌、离心，取沉淀物；(4)将沉淀物用加入1‑3倍体积的去离子水进行溶解，并进行热处理后，迅速冰浴至4℃以下，然后，加入K2HPO4缓冲液，搅拌、离心后获得上清液；(5)采用螺旋梯度洗脱技术对上清液进行纯化处理，获得纯化酶液；(6)将纯化酶液通过透析工艺除去盐离子，并最终将精致酶液进行冷冻干燥，可以获得最终的猪血SOD成品。