[发明专利]一种从猪血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法

权利要求书

1.一种从猪血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：依照如下步骤进行：

(1)向猪血中加入抗凝剂，离心3000rpm离心10～30min去血浆，收集红细胞；然后加入红细胞体积3～5倍的0.9％NaCl溶液进行清洗，离心4000rpm离心10～30min，弃去上清液后，收集红细胞并加入红细胞体积1～3倍体积的去离子水，0～4℃水浴下静置10-15h后得到溶血液；

(2)向溶血液中缓慢加入4℃以下冷预过的95％乙醇后，再缓慢加入预冷过的的氯仿，然后搅拌、静置、离心后收集上清液获得粗酶液；

(3)向粗酶液中加入丙酮，然后搅拌、离心，取沉淀物；

(4)将沉淀物用加入1-3倍体积的去离子水进行溶解，并进行热处理后，迅速冰浴至4℃以下，然后，加入K₂HPO₄缓冲液，搅拌、离心后获得上清液；

(5)采用螺旋梯度洗脱技术对上清液进行纯化处理，获得纯化酶液；

(6)将纯化酶液通过透析工艺除去盐离子，并最终将精致酶液进行冷冻干燥，可以获得最终的猪血SOD成品。

2.根据权利要求1所述的一种从猪血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：上述抗凝剂采用草酸钾溶液，其浓度为2～5％，其体积是猪血体积的10％。

3.根据权利要求1所述的一种从猪血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：上述去离子水的pH＝9。

4.根据权利要求1所述的一种从猪血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：上述步骤(2)中95％乙醇的加入量是溶血液体积的0.2～0.5倍，氯仿的加入量是溶血液体积的0.1～0.5倍，溶血液加入95％乙醇和氯仿后搅拌10-20min、静置0.5-1h、4000rmp离心10～30min，收集上清液获得粗酶液。

5.根据权利要求1所述的一种从猪血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：上述步骤(3)中丙酮的加入量是粗酶液体积的1～3倍，粗酶液加入丙酮后搅拌10-15min，4000rmp离心10～30min，取沉淀物。

6.根据权利要求1所述的一种从猪血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：上述步骤(4)中热处理的条件为温度40～70℃、时间10～30min；K₂HPO₄缓冲液的加入量是沉淀物体积的20～30倍，沉淀物加入K₂HPO₄缓冲液后搅拌5-8min，然后4000rmp离心10～30min，获得上清液。

7.根据权利要求1所述的一种从猪血中提取超氧化物歧化酶SOD的方法，其特征在于：上述步骤(5)中螺旋梯度洗脱技术采用浓度为2～50mmol/L、pH值为7.2～9.0的K₂HPO₄缓冲液通过梯度盐析原理使杂质逐级沉淀的方法来实现SOD酶的纯化。