[发明专利]一种KRAS基因突变检测液相芯片

摘要

本发明公开了一种KRAS基因突变检测液相芯片，其主要包括有：(A)针对KRAS基因的突变位点，分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对：分别包被有特异的anti-tag序列的、具有不同颜色编码的微球，所述anti-tag序列能相应地与所选的tag序列互补配对；用于扩增出含有Codon 12、Codon 13和/或Codon 61的相应突变位点的KRAS基因目标序列的扩增引物。本发明所提供的检测方法与测序法的吻合率高达100％。所制备的KRAS基因突变检测液相芯片具有非常好的信号-噪声比，并且所设计的探针以及anti-tag序列之间基本上不存在交叉反应，可实现同一位点多种突变型和多种突变位点的并行检测。

主权项

一种KRAS基因突变检测液相芯片，其特征是，主要包括有：(A)针对KRAS基因的突变位点，分别设计的野生型和突变型的ASPE引物对：每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物组成，所述tag序列选自SEQ ID NO.109～SEQ ID NO.126中的序列；所述特异性引物是：针对Codon 12的、来源于SEQ ID NO.1或其反向互补序列中的碱基序列、和来源于SEQ ID NO.2～SEQ IDNO.7中一条以上或其反向互补序列中一条以上的碱基序列；针对Codon 13的、来源于SEQ IDNO.8或其反向互补序列中的碱基序列、和来源于SEQ ID NO.9～SEQ ID NO.14中一条以上或其反向互补序列中一条以上的碱基序列；和/或针对Codon 61的、来源于SEQ ID NO.15或其反向互补序列中的碱基序列、和来源于SEQ ID NO.16～SEQ ID NO.18中一条以上或其反向互补序列中一条以上的碱基序列；上述特异性引物的3’端的最后3位碱基中任一个碱基为突变位点，所述特异性引物的Tm值在52～58℃之间；(B)分别包被有特异的anti‑tag序列的、具有不同颜色编码的微球，所述anti‑tag序列选自SEQID NO.127～SEQ ID NO.144中的序列，且所述anti‑tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；(C)用于扩增出具有Codon 12、Codon13和/或Codon61的相应突变位点的KRAS基因目标序列的扩增引物。