[发明专利]一种同时检测人血液中的11个运动相关基因和4个内参基因的基因表达的方法

摘要

本发明提供了一种同时检测人血液中的11个运动相关基因和4个内参基因的基因表达的方法。本发明的方法是运用多重PCR、通用引物和核酸杂交的方法在同一反应体系中实现了同时对15个基因表达情况的检测。这些基因是人的睫状神经营养因子基因、肾上腺素能β2受体基因、瘦素受体基因、转化生长因子-β1基因、线粒体解偶联蛋白2基因、磷酸脂酶C-γ1基因、肿瘤坏死因子基因、结合珠蛋白基因、RAD1同源物基因、缺氧诱导因子1α基因和胰岛素样生长因子1基因；还有四个内参基因为组蛋白脱乙酰化酶基因、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因、18s-rRNA基因和β-肌动蛋白基因。本发明所述的方法与传统的实时荧光定量PCR等检测方法相比，具有高通量，快速，自动化程度高，成本适中，准确度和灵敏度高等优点。

主权项

一种同时检测人血液中的11个运动相关基因和4个内参基因的基因表达的方法，其特征在于这些基因是人的睫状神经营养因子基因、肾上腺素能β2受体基因、瘦素受体基因、转化生长因子-β1基因、线粒体解偶联蛋白2基因、磷酸脂酶C-γ1基因、肿瘤坏死因子基因、结合珠蛋白基因、RAD1同源物基因、缺氧诱导因子1α基因和胰岛素样生长因子1基因，四个内参基因为组蛋白脱乙酰化酶基因、3-磷酸甘油醛脱氢酶基因、18s-rRNA基因和β-肌动蛋白基因，其表达的方法包括下述步骤：(1)设计针对每个基因的RT引物和PCR引物如序列1～30所述序列；(2)委托生物公司合成引物，并用HPLC纯化；(3)收集优秀运动员全血标本并提取样品RNA，在PCR仪上进行RT和PCR反应；(4)将PCR反应产物上样到BECKMAN公司的GenomeLabTM GeXP多重基因表达遗传分析系统仪器上，通过毛细管电泳分离PCR产物；用多重基因表达遗传分析系统上配套软件eXpressMap分析结果，导出数据。