[发明专利]一种壳聚糖的层层自组装蛋白质印迹聚合物的制备方法

摘要

本发明涉及一种壳聚糖的层层自组装蛋白质印迹聚合物的制备方法。本发明先制备交联壳聚糖球形粒子基材，再通过层层自组装的方法将带负电的模板蛋白质BSA和带正电的壳聚糖交替吸附，通过静电作用将模板蛋白质及壳聚糖交替自组装到交联壳聚糖球形粒子基材的表面，再进行模板蛋白质分子的印迹，然后采用洗脱剂脱除模板蛋白质分子，从而使基材的表面留下可以与模板蛋白质相互识别的位点及空穴结构，使其具有蛋白质选择性吸附和分离功能，通过上述方法得到一种壳聚糖的层层自组装蛋白质印迹聚合物。该方法制备的聚合物具有良好的选择性吸附模板蛋白质的能力，并且具有良好的蛋白质选择性分离功能，同时，该制备方法较简单，制各条件温和，具有较好的可重复利用性能。

主权项

一种壳聚糖的层层自组装蛋白质印迹聚合物的制备方法，其特征在于它包括如下步骤：1)制备交联壳聚糖球形粒子基材：①按壳聚糖∶乙酸溶液∶氢氧化钠溶液＝(1.5～3.0)g∶(50～100)mL∶(1～2)L，选取壳聚糖、乙酸溶液和氢氧化钠溶液，其中，乙酸溶液的质量百分比为2％，氢氧化钠溶液的浓度为2mol/L；将壳聚糖加入到乙酸溶液中，搅拌至壳聚糖充分溶解后，超声除去气泡后得到壳聚糖溶液；再用注射器将壳聚糖溶液以2～4mL/min的滴加速度逐滴加入到上述氢氧化钠溶液中，溶液中出现白色球形粒子，待白色球形粒子沉淀到底部后，分离白色球形粒子并用去离子水冲洗4～6次，直到溶液pH值至7；然后分离，得到壳聚糖球形粒子；②按壳聚糖∶去离子水∶环氧氯丙烷＝(1.5～3.0)g∶(50～150)mL∶0.3～0.6g，选取去离子水和环氧氯丙烷，并将所述去离子水装于锥形瓶中；将壳聚糖球形粒子转到装有去离子水的锥形瓶中，并用2～4mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液的pH值至10，再向溶液中加入环氧氯丙烷作为交联剂，在室温下反应48h，反应完成后，用去离子水冲洗4～6次，得到交联壳聚糖球形粒子；取上述交联壳聚糖球形粒子置于烧杯中，加入0.012mol/L盐酸溶液处理10～20min，然后分离出球形粒子用去离子水冲洗4～6次，得到交联壳聚糖球形粒子基材；2)牛血清白蛋白与壳聚糖在交联壳聚糖球形粒子基材表面的自组装：①配制含氯化钠浓度为0.14mol/L的牛血清白蛋白磷酸缓冲溶液，其中含牛血清白蛋白的浓度为1mg/mL；配制含氯化钠浓度为0.14mol/L的壳聚糖溶液，其中含壳聚糖的浓度为1.5mg/mL；②将上述交联壳聚糖球形粒子基材置于牛血清白蛋白磷酸缓冲溶液中15～20min，再将粒子分离出后用0.14mol/L氯化钠溶液清洗4～6次，然后将粒子置于壳聚糖溶液中15～20min，再将粒子分离出后用0.14mol/L氯化钠溶液清洗4～6次，完成交联壳聚糖球形粒子基材表面的第一个双分子层自组装，得到含一个双分子层的表面自组装壳聚糖粒子；③重复上述步骤2)的②的过程，交联壳聚糖球形粒子基材在牛血清白蛋白磷酸缓冲溶液和壳聚糖溶液中交替自组装5次，得到壳聚糖为最外层的含五个双分子层的表面自组装壳聚糖粒子；3)牛血清白蛋白在自组装壳聚糖基材表面的印迹：①按壳聚糖∶去离子水∶环氧氯丙烷＝(1.5～3.0)g∶(50～100)mL∶0.3～0.6g，选取去离子水和环氧氯丙烷，并将所述去离子水装于锥形瓶中；②将上述表面自组装壳聚糖粒子转移到装有去离子水的锥形瓶中，并用2～4mol/L的氢氧化钠溶液调节溶液的pH值至10，加入环氧氯丙烷在室温下反应48h，反应结束后，分离出粒子，用去离子水冲洗4～6次，得到壳聚糖粒子；4)模板蛋白质的洗脱：将上述步骤3)中得到的壳聚糖粒子用十二烷基硫酸钠与乙酸的混合溶液进行洗脱，以脱除模板蛋白质牛血清白蛋白，采用紫外-可见分光光度计在280nm波长处检测洗脱液中蛋白质的浓度，直至洗脱液中蛋白质吸光值为0，得到壳聚糖的层层自组装蛋白质印迹聚合物。