[发明专利]通过定向进化构建的活力提高的脂肪酶突变体有效
申请号: | 200910235185.3 | 申请日: | 2009-11-11 |
公开(公告)号: | CN101899427A | 公开(公告)日: | 2010-12-01 |
发明(设计)人: | 喻晓蔚;徐岩;王睿 | 申请(专利权)人: | 江南大学 |
主分类号: | C12N9/20 | 分类号: | C12N9/20 |
代理公司: | 无锡市大为专利商标事务所 32104 | 代理人: | 时旭丹;刘品超 |
地址: | 214122 江苏省无锡市*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 通过定向进化构建的活力提高的脂肪酶突变体,属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了一种由华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC M 201021脂肪酶基因经定向进化而获得的一系列脂肪酶突变体。在各突变体的氨基酸序列中,涉及到的氨基酸突变为Ala129Ser、Lys161Arg、Thr195Tyr、Ala230Thr、Val261Gly、Lys322Arg、Ser373Asn以及上述氨基酸两个、三个或四个突变的组合。以转换数Kcat表示,这些突变体的酶活较出发菌株得到了提高。 | ||
搜索关键词: | 通过 定向 进化 构建 活力 提高 脂肪酶 突变体 | ||
【主权项】:
1.通过定向进化构建的活力提高的脂肪酶突变体,其特征是由华根霉(Rhizopuschinensis)CCTCCM201021脂肪酶基因(Genbank登录号EF405962),运用易错PCR方法,通过多轮重组和定点突变,经定向进化而获得的脂肪酶突变体,在突变体的氨基酸序列中,包含氨基酸突变Ala129Ser、Lys161Arg、Thr195Tyr、Ala230Thr、Val261Gly、Lys322Arg、Ser373Asn以及上述氨基酸两个、三个或四个突变的组合;以转换数Kcat表示,脂肪酶突变体的酶活较出发菌株得到了提高;突变体的测序结果及其Kcat提高的倍数为:脂肪酶突变体氨基酸取代位置Kcat(/min)Kcat提高的倍数出发菌株脂肪酶-11381.0突变体1-1Ala129Ser12521.1突变体1-2Lys161Arg14791.3突变体1-3Thr195Tyr14791.3突变体1-4Ala230Thr18211.6突变体1-5Val261Gly19351.7突变体1-6Lys322Arg13661.2突变体1-7Ser373Asn17071.5突变体2-1Ala129Ser/Lys161Arg22782突变体2-2Ala129Ser/Ala230Thr13651.2突变体2-3Ala129Ser/Val261Gly15931.4突变体2-4Lys161Arg/Thr195Tyr28452.5突变体2-5Lys161Arg/Lys322Arg17071.5突变体2-6Lys161Arg/Ser373Asn20481.8突变体2-7Ala230Thr/Ser373Asn17071.5突变体2-8Val261Gly/Ser373Asn37263.3突变体3-1Ala129Ser/Ala230Thr/Val261Gly31862.8突变体3-2Ala129Ser/Ala230Thr/Lys322Arg22782突变体3-3Lys161Arg/Thr195Tyr/Ser373Asn26172.3突变体3-4Lys161Arg/Ala230Thr/Ser373Asn22782突变体3-5Lys161Arg/Val261Gly/Lys322Arg27312.4突变体3-6Ala230Thr/Lys322Arg/Ser373Asn28452.5突变体4-1Ala129Ser/Lys161Arg/Ala230Thr/20731.8Lys322Arg。
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- 2015-10-27 - 2018-08-03 - C12N9/20
- 本发明公开了一种脂肪酶LIPASE7及其编码基因和应用。本发明从海洋放线菌(Pseudonocardia antitumoralis)SCSIO 01299中克隆得到一个新的脂肪酶基因——脂肪酶基因lipase7,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示,全长为927bp,其编码的脂肪酶LIPASE7的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示,共包含308个氨基酸。通过克隆脂肪酶基因lipase7并将其连接表达载体pET‑28a(+)后转化大肠杆菌BL21(DE3),培养并诱导表达后,得到了重组表达的脂肪酶LIPASE7。脂肪酶LIPASE7作为催化剂拆分(±)‑2‑氯丙酸甲酯,可制备得到99%光学纯度的(R)‑2‑氯丙酸甲酯;脂肪酶LIPASE7作为催化剂拆分(±)‑2‑氯丙酸乙酯,可得到98%光学纯度的(R)‑2‑氯丙酸乙酯。脂肪酶LIPASE7具有稳定性高、催化效率高的优点,可用于生物医药、化妆品和精细化工等领域。
- 一种海洋来源高温脂肪酶及其晶体和制备方法-201810307147.3
- 王永华;袁红;蓝东明;赵泽鑫;杨博 - 华南理工大学
- 2018-04-08 - 2018-07-31 - C12N9/20
- 本发明属于酶工程技术领域,公开了一种海洋来源高温脂肪酶及其晶体和制备方法。海洋来源高温脂肪酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。所述海洋来源高温脂肪酶的制备方法,将海洋来源高温脂肪酶的序列克隆至pET22b(+)原核表达载体并将该载体转化至大肠杆菌感受态细胞Rosetta(DE3)表达,通过亲和层析和排阻凝胶层析纯化,得到海洋来源高温脂肪酶水溶液。本发明脂肪酶具有很好的高温和有机溶剂耐受性,其酯化和水解脂质的效率高,甚至比商品化脂肪酶435(诺维信)酯化合成三甘酯的效果更好。
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