[发明专利]一种用于高GC含量基因的PCR扩增体系及扩增方法

摘要

本发明属于生物工程技术领域，公开了一种适用于高GC含量基因的PCR扩增体系及扩增方法，所述PCR扩增体系包括：DNA聚合酶、MgCl₂、dNTP、上游引物、下游引物、DNA模板、二次蒸馏水；其特征在于：所述PCR扩增体系还包括：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，二硫苏糖醇，牛血清白蛋白和添加剂。本发明所述PCR扩增技术可扩增GC含量超过80％的目的基因；可扩增高GC含量的目的基因长达1.5Kb；可以成功地扩增人、动物、植物和微生物等不同来源不同复杂程度的模板基因；并且操作步骤少，操作时间短，所需仪器设备简单，能普遍适用于科学研究和医疗诊断。

主权项

1.一种用于高GC含量基因的PCR扩增体系，所述PCR扩增体系包括：DNA聚合酶、MgCl2、dNTP、上游引物、下游引物、DNA模板、二次蒸馏水；其特征在于：所述PCR扩增体系还包括：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，二硫苏糖醇，牛血清白蛋白和添加剂；所述添加剂选自：甘油、甘露醇、山梨醇、聚乙二醇、正丙砜、二乙砜、甲基磺酰甲烷、二甲亚砜、2，4-二甲基噻吩烷、3-环丁烯砜、甜菜碱、1，5，6-三氢-2-甲基-4-羧基嘧啶、1，6-二氢-2-甲基-4-羧基-5羟基嘧啶、1，4，5，6-四氢-2-甲基-嘧啶或4，5，6，7-四氢-2-甲基-1氢-1，3-二氮杂卓-4-羧酸中的一种或一种以上的混合物；其中，每25μL PCR扩增体系包括：DNA聚合酶1U～2.5U，MgCl2 2.5×10-5mmol～6.25×10-4mmol，dNTP 5×10-6mmol～1×10-5mmol，上游引物2.5×10-5μmol～5×10-5μmol，下游引物2.5×10-5μmol～5×10-5μmol，DNA模板10～100ng，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐1×10-3mmol～1.5×10-3mmol，二硫苏糖醇2×10-6mmol～3×10-6mmol，牛血清白蛋白0.5μg～0.7μg，添加剂0.2μL～0.3μL。