[发明专利]一种用于高GC含量基因的PCR扩增体系及扩增方法

权利要求书

1.一种用于高GC含量基因的PCR扩增体系，所述PCR扩增体系包括： DNA聚合酶、MgCl₂、dNTP、上游引物、下游引物、DNA模板、二次蒸馏水； 其特征在于：所述PCR扩增体系还包括：三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，二硫苏糖 醇，牛血清白蛋白和添加剂；

所述添加剂选自：甘油、甘露醇、山梨醇、聚乙二醇、二乙砜、甲基磺酰 甲烷、二甲亚砜、2，4-二甲基噻吩烷、3-环丁烯砜、甜菜碱、1，5，6-三氢-2-甲基 -4-羧基嘧啶、1，4，5，6-四氢-2-甲基-嘧啶中的一种；或者，下列组合中的一种：

甘露醇，二乙砜，甜菜碱的混合物；聚乙二醇，正丙砜，二甲亚砜，1，5，6- 三氢-2-甲基-4-羧基嘧啶的混合物；甘油，聚乙二醇，1，4，5，6-四氢-2-甲基-嘧啶 的混合物；正丙砜，甲基磺酰甲烷，1，6-二氢-2-甲基-4-羧基-5羟基嘧啶，甜菜 碱的混合物；二甲亚砜，3-环丁烯砜，1，5，6-三氢-2-甲基-4-羧基嘧啶，4，5，6，7- 四氢-2-甲基-1氢-1，3-二氮杂卓-4-羧酸的混合物；甘露醇，二乙砜，二甲亚砜， 甜菜碱，1，4，5，6-四氢-2-甲基-嘧啶的混合物；正丙砜，甲基磺酰甲烷，2，4-二甲 基噻吩烷，甜菜碱，1，5，6-三氢-2-甲基-4-羧基嘧啶的混合物；山梨醇，聚乙二醇， 二甲亚砜，1，5，6-三氢-2-甲基-4-羧基嘧啶，1，4，5，6-四氢-2-甲基-嘧啶的混合物； 甘油，二甲亚砜，甜菜碱的混合物；甘露醇，二乙砜，3-环丁烯砜，1，6-二氢-2- 甲基-4-羧基-5羟基嘧啶的混合物；甲基磺酰甲烷，3-环丁烯砜，甜菜碱，4，5，6，7- 四氢-2-甲基-1氢-1，3-二氮杂卓-4-羧酸的混合物；山梨醇，正丙砜，1，5，6-三氢-2- 甲基-4-羧基嘧啶的混合物；甲基磺酰甲烷，二甲亚砜，1，6-二氢-2-甲基-4-羧基 -5羟基嘧啶，1，4，5，6-四氢-2-甲基-嘧啶的混合物；甘油，山梨醇，甲基磺酰甲烷， 3-环丁烯砜，甜菜碱的混合物；聚乙二醇，二乙砜，甜菜碱，1，4，5，6-四氢-2-甲 基-嘧啶的混合物；

其中，每25μL PCR扩增体系包括：DNA聚合酶1U～2.5U，MgCl₂ 2.5× 10^-5mmol～6.25×10^-4mmol，dNTP 5×10^-6mmol～1×10^-5mmol，上游引物2.5 ×10^-5μmol～5×10^-5μmol，下游引物2.5×10^-5μmol～5×10^-5μmol，DNA模板 10～100ng，三羟甲基氨基甲烷盐酸盐1×10^-3mmol～1.5×10^-3mmol，二硫苏 糖醇2×10^-6mmol～3×10^-6mmol，牛血清白蛋白0.5μg～0.7μg，添加剂 0.2μL～0.3μL。

2.根据权利要求1所述的用于高GC含量基因的PCR扩增体系，其特征 在于，所述高GC含量基因中GC含量高达85％。

3.根据权利要求1所述的用于高GC含量基因的PCR扩增体系，其特征 在于，所述高GC含量基因选自：人类与动物基因组中的原癌基因、疾病相关 基因的调控序列、与植物生长、分化相关的调控序列或微生物代谢途径中关键 酶的基因中的一种。

4.根据权利要求1所述的用于高GC含量基因的PCR扩增体系，其特征 在于，所述高GC含量基因的长度的最大值达1.5Kb。

5.根据权利要求1所述的用于高GC含量基因的PCR扩增体系，其特征 在于，所述PCR扩增体系适用范围为所有生物的基因扩增。

6.根据权利要求1所述的用于高GC含量基因的PCR扩增体系，其特征 在于，所述DNA聚合酶选自：Taq DNA聚合酶、KoD DNA聚合酶、Pwo DNA 聚合酶、Pfu DNA聚合酶、Vent DNA聚合酶、Bca Best DNA聚合酶或Sac DNA 聚合酶中的一种。