[发明专利]一种降解邻甲基苯酚菌种的筛选方法

摘要

一种降解邻甲基苯酚菌种的筛选方法，它涉及一种菌种的筛选方法。它解决了现有生物强化法筛选的菌株对煤化工废水中其他化学物质的抗性低，导致邻甲基苯酚的降解率低的问题。方法：一、取污泥废水混合物曝气后接种并培养，沉降后取上层菌液，投加药剂，培养后得菌悬液a；二、将菌悬液a接种并筛选培养，得培养物I；三、将培养物I接种并筛选培养，得培养物II；四、将培养物II接种于并筛选培养，得培养物III；五、将培养物III接种并筛选培养，得培养物IV；六、将培养物IV接种并富集培养，即得降解邻甲基苯酚菌种。本发明获得的菌株对煤化工废水中其他化学物质的抗性更强，对浓度为800mg/L的邻甲基苯酚的降解率达到了99.8％。

主权项

一种降解邻甲基苯酚菌种的筛选方法，其特征在于降解邻甲基苯酚菌种的筛选方法按以下步骤实现：一、取煤化工好氧段废水处理系统的污泥废水混合物，在34～36℃下曝气48～50h，然后按1∶5的体积比将曝气后的污泥废水混合物接种于混合酚浓度为400mg/L的培养基中，在34～36℃下震荡培养18～24h后沉降30～40min，取上层菌液，然后向上层菌液中投加药剂，搅拌均匀后在34～36℃下震荡培养18～24h，得菌悬液a；二、按1∶20的体积比将菌悬液a接种于邻甲基苯酚浓度为200mg/L的筛选培养基中，然后在34～36℃下震荡培养18～24h，得培养物I；三、按1∶20的体积比将培养物I接种于邻甲基苯酚浓度为400mg/L的筛选培养基中，然后在34～36℃下震荡培养18～24h，得培养物II；四、按1∶20的体积比将培养物II接种于邻甲基苯酚浓度为600mg/L的筛选培养基中，然后在34～36℃下震荡培养18～24h，得培养物III；五、按1∶20的体积比将培养物III接种于邻甲基苯酚浓度为800mg/L的筛选培养基中，然后在34～36℃下震荡培养18～24h，得培养物IV；六、采用平板划线分离法将培养物IV接种于富集培养基上，在34～36℃下震荡培养18～24h，即得降解邻甲基苯酚菌种；其中步骤一中混合酚浓度为400mg/L的培养基为每升培养基中由0.2gMgSO4·H2O、0.1gFeSO4·H2O、0.1gMnSO4·H2O、0.2gCaCl2、0.5gK2HPO4、0.5gKH2PO4、0.45g(NH4)2SO4、0.1gNaCl、400mg混合酚和余量的蒸馏水组成，并调节pH至6.9～7.1，混合酚由苯酚、甲基酚、二甲基苯酚和苯二酚按质量比30∶10∶10∶25混合而成；步骤一中投加药剂的每升菌悬液a中有0.1～0.3g MgSO4·H2O、0.05～0.1g FeSO4·H2O、0.05～0.1gMnSO4·H2O、0.1～0.3g CaCl2、0.4～0.6g K2HPO4、0.4～0.6g KH2PO4、0.4～0.5g(NH4)2SO4、0.05～0.1g NaCl和1.5～2.5g葡萄糖；步骤二中邻甲基苯酚浓度为200mg/L的筛选培养基为每升培养基中由0.1～0.3gMgSO4·H2O、0.05～0.1gFeSO4·H2O、0.05～0.1gMnSO4·H2O、0.1～0.3gCaCl2、0.4～0.6gK2HPO4、0.4～0.6gKH2PO4、0.4～0.5g(NH4)2SO4、0.05～0.1gNaCl、200mg邻甲基苯酚和余量的蒸馏水组成；步骤三中邻甲基苯酚浓度为400mg/L的筛选培养基为每升培养基中由0.1～0.3gMgSO4·H2O、0.05～0.1gFeSO4·H2O、0.05～0.1gMnSO4·H2O、0.1～0.3gCaCl2、0.4～0.6gK2HPO4、0.4～0.6gKH2PO4、0.4～0.5g(NH4)2SO4、0.05～0.1gNaCl、400mg邻甲基苯酚和余量的蒸馏水组成；步骤四中邻甲基苯酚浓度为600mg/L的筛选培养基为每升培养基中由0.1～0.3gMgSO4·H2O、0.05～0.1gFeSO4·H2O、0.05～0.1gMnSO4·H2O、0.1～0.3gCaCl2、0.4～0.6gK2HPO4、0.4～0.6gKH2PO4、0.4～0.5g(NH4)2SO4、0.05～0.1gNaCl、600mg邻甲基苯酚和余量的蒸馏水组成；步骤五中邻甲基苯酚浓度为800mg/L的筛选培养基为每升培养基中由0.1～0.3gMgSO4·H2O、0.05～0.1gFeSO4·H2O、0.05～0.1gMnSO4·H2O、0.1～0.3gCaCl2、0.4～0.6gK2HPO4、0.4～0.6gKH2PO4、0.4～0.5g(NH4)2SO4、0.05～0.1gNaCl、800mg邻甲基苯酚和余量的蒸馏水组成；步骤六中富集培养基由1000mL蒸馏水、4.5～5.5g牛肉膏、9～11g蛋白膝、19～21g琼脂和4.5～5.5gNaCl制成，并调节pH至7.5～8.0。