[发明专利]一种制备短裸甲藻毒素单克隆抗体的方法

摘要

一种制备短裸甲藻毒素单克隆抗体的方法涉及免疫安全检测技术中单克隆抗体的制备，采用如下步骤完成，(1)完全抗原的制备，包括免疫抗原(BTX-IgG)和检测抗原(BTX-BSA)制备，(2)动物免疫，(3)取血清效价大于10⁴的被免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞按常规方法融合，制备单克隆抗体。用本免疫方法所制备的单克隆抗体腹水效价可达2.4×10⁵，亲和常数达0.6×10⁹M^-1，腹水抗体效价和亲和常数不低于传统免疫方法所得抗体，免疫速度快，从而有效地降低单克隆抗体制备的成本。

主权项

1、一种制备短裸甲藻毒素单克隆抗体的方法，其特征在于：采用如下步骤完成：1)完全抗原的制备免疫抗原(BTX-IgG)和检测抗原(BTX-BSA)具体制备方法如下：(1)混合液的制备：取0.5mg BTX、0.08mg N-羟丁二酰亚胺、0.15mg N，N双环乙烷碳二亚胺于0.5mL DMF中混均，在10-30℃条件下孵育2h制成混合液，并将混合液平均分成两等份；(2)载体蛋白反应液的制备：取0.4mg IgG溶于0.5mL0.1mol/L NaHCO3缓冲液中，混匀后做为载体蛋白反应液；(3)将步骤(2)制备的载体蛋白反应液加入步骤(1)制备的混合液中，在10-30℃条件下孵育2h，所得产物为免疫抗原(BTX-IgG)，超滤离心去除未反应的物质，分装后-20℃保存备用；(4)取0.4mg BSA，溶于0.5mL0.1mol/L NaHCO3缓冲液中，混匀后做为载体蛋白反应液；(5)将步骤(4)制备的载体蛋白反应液加入步骤(1)制备的混合液中，在10-30℃条件下孵育2h，所得产物为检测抗原(BTX-BSA)，超滤离心去除未反应的物质，分装后-20℃保存备用；2)动物免疫(1)免疫动物为8周龄雄性BALB/C小鼠，免疫前断尾采血作为阴性血清；(2)配制免疫抗原标准液2μg/μL，首次免疫使用弗氏完全佐剂乳化免疫抗原，抗原佐剂比1∶1，腹腔注射100μL/鼠，(3)18天后采用脾内注射法注射，首免21天后断尾取血检测效价；3)取血清效价大于104的被免疫小鼠脾细胞与SP2/0 骨髓瘤细胞按常规方法融合，制备单克隆抗体。