[发明专利]一种使复制缺陷型腺病毒选择性复制的方法和用途

摘要

本发明属生物医学领域，涉及一种使复制缺陷型腺病毒选择性复制的方法和用途。本发明所述复制缺陷型腺病毒，其复制必需元件E1A基因受肿瘤细胞或肿瘤组织特异性启动子调控，由真核表达质粒或重组腺相关病毒载体携带，在肿瘤局部反式提供。腺病毒能够通过本身的溶瘤作用、携带的治疗基因的作用以及E1A的抑癌作用三种作用协同有效杀伤肿瘤细胞而对正常的组织或细胞基本无害。本发明可以方便、快捷地在肿瘤局部赋予任何一个用于肿瘤基因治疗的复制缺陷型腺病毒以选择性增殖、复制能力。能单独使用或与现有的肿瘤治疗方法结合使用，显著提高肿瘤治疗效果并减少副作用。

主权项

一种使复制缺陷型腺病毒选择性复制的方法，其特征是腺病毒复制必需的早期基因的启动子，被肿瘤细胞或肿瘤组织特异性的启动子所取代，由真核表达质粒或重组腺相关病毒载体携带，在肿瘤局部反式提供，使复制缺陷型腺病毒特在肿瘤细胞中复制，在正常细胞或组织中不复制，包括下述步骤：1)通过PCR反应和克隆技术，分离肿瘤或组织特异性启动子；2)构建携带肿瘤或组织特异性启动子调控腺病毒复制必需元件E1A基因的真核表达载体和复制缺陷型腺病载体；3)包装、扩增、纯化重组腺相关病毒(rAAV)，并进行测序及功能鉴定；4)构建和鉴定携带报告基因及治疗基因的复制缺陷型腺病毒载体；5)包装、扩增、纯化腺病毒，并进行病毒滴度及功能鉴定；6)活体肿瘤内复制缺陷型腺病毒原位增殖、复制；7)活体肿瘤内复制缺陷型腺病毒原位复制对肿瘤生长的抑制。