[发明专利]栎枯萎病菌实时荧光PCR检测方法无效
| 申请号： | 200910034194.6 | 申请日： | 2009-09-02 |
| 公开（公告）号： | CN101701247A | 公开（公告）日： | 2010-05-05 |
| 发明（设计）人： | 吴翠萍;陈贯源;李彬;粟寒;郑斯竹;安榆林;叶建仁 | 申请（专利权）人： | 江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N21/64;C12R1/645 |
| 代理公司： | 南京众联专利代理有限公司 32206 | 代理人： | 王荷英 |
| 地址： | 210001*** | 国省代码： | 江苏;32 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明涉及一种栎枯萎病菌实时荧光PCR检测方法，以样品DNA作为模板，利用特异性引物CF01/CF02以及荧光染料SYBR Green I进行栎枯萎病菌的Real-timePCR扩增，体系在ABI 7500Fast荧光定量PCR仪中预扩增95℃30秒，接着95℃3秒，60℃延伸25秒，共40个循环，在每个循环的延伸阶段同步多次采集荧光；立即进行熔解曲线分析，程序为：95℃，1min；60℃，1min；从60℃开始每升高0.5℃保持10s，连续升高70次，直到95℃为止；如果扩增图谱有出现明显的“S”形曲线，且融解曲线中的Tm吸收峰值与阳性对照的相一致，表示所检测的病菌样品为栎枯萎病菌。本方法对栎枯萎病菌检测灵敏度高，方便快速，可用于各检疫口岸对原木、木质包装、植物性材料以及随之携带的土壤栎枯萎病菌的实时监控。 | ||
| 搜索关键词： | 枯萎 病菌 实时 荧光 pcr 检测 方法 | ||
【主权项】：
栎枯萎病菌实时荧光PCR检测方法，其特征是包含如下步骤：①.提取栎枯萎病菌待检样品的DNA，低温冷冻保存备用；②.设计一对能鉴别栎枯萎病菌的特异性引物CF01/CF02，其序列为：上游引物CF01：5’-GGCAGGGACTTCTTTCTT-3’；下游引物CF02：5’-AAGGCTTGAGTGGTGAAA-3’；③.利用特异性引物CF01/CF02，以及荧光染料SYBR Green I对样品DNA进行扩增：扩增反应体系包含基因组DNA 1μl、10μM的上、下游引物CF01/CF02各0.4μl、SYBR premix Ex Taq(2×)0.4μl、Rox DyeII0.4μl，灭菌水补足20μl；以上体系预扩增95℃30秒，接着95℃3秒，60℃延伸25秒，共40个循环，在每个循环的延伸阶段同步多次采集荧光；立即进行熔解曲线分析，程序为：95℃，1min；60℃，1min；从60℃开始每升高0.5℃保持10s，连续升高70次，直到95℃为止；④.扩增结果分析PCR扩增结束后利用ABI 7500Fast荧光定量PCR仪自带的分析软件，对得到的扩增图谱和融解曲线进行分析，如果扩增图谱有出现明显的“S”形曲线，且融解曲线中的Tm吸收峰值与阳性对照一致，则说明所检测的病菌样品为栎枯萎病菌。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，未经江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/200910034194.6/，转载请声明来源钻瓜专利网。
