[发明专利]一种血吸虫感染性钉螺检测试剂盒及其检测方法

摘要

一种血吸虫感染性钉螺检测试剂盒及其检测方法，属于寄生虫病传播媒介检测领域。本发明提供一种基于环介导等温DNA扩增技术(LAMP)检测血吸虫感染性钉螺的试剂盒和检测方法，该试剂盒是根据LAMP技术原理，设计扩增日本血吸虫非长未端重复反转录转座子基因(AF412214)的第20bp至231bp之间的DNA片段的6对特异性引物，构建用于检测感染性钉螺体内血吸虫基因的LAMP方法，达到区别血吸虫感染性钉螺和非常感染性钉螺之目的。该方法与常规的血吸虫感染性钉螺检测方法相比，具有操作简便快速、敏感特异、不需要特殊的设备等特点，适合于血吸虫病现场防治人员使用。

主权项

1、一种血吸虫感染性钉螺检测试剂盒，其特征是该试剂盒由一套引物混合物，10倍浓缩的环介导等温DNA扩增反应缓冲液，DNA聚合酶，阳性对照样本，阴性对照样本，显色试剂和样本DNA抽提试剂组成；所述的一套引物混合物是由一对外引物和一对内引物组成，其名称和序列如下：外引物1：SEQ ID NO.2，外引物2：SEQ ID NO.3，内引物1：SEQ ID NO.4，内引物2：SEQ ID NO.5，所述的一对外引物与一对内引物之间的摩尔数比例为1:6～9；所述的DNA聚合酶为具有链置换作用的Bst DNA聚合酶，活性单位为8U/μL；所述10倍浓缩的环介导等温DNA扩增反应缓冲液组成是：200mmol三羟甲基氨基甲烷、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、60-120mmol/L硫酸镁、体积百分1％曲拉通-X100、4～10mol/L甜菜碱和16mmol/L的dNTP；所述阳性对照样本为含本发明试剂盒检测的日本血吸虫靶DNA片段的重组质粒；所述的阴性对照样本为灭菌去离子水；所述的显色试剂为10倍浓缩的荧光试剂SYBR Green I溶液；所述的样本DNA抽提试剂包括：含50mmol/L三羟甲基氨基甲烷、体积百分0.5％Tween-20、pH8.0的样本裂解液；10mg/mL蛋白酶K；用0.1mol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液平衡到pH8.0的苯酚；氯仿；8mol/L醋酸胺；无水乙醇；70％乙醇；灭菌去离子水。