[发明专利]一种核苷酸突变位点的检测方法

摘要

本发明提供了一种核苷酸突变位点的检测方法，包括如下步骤：(1)确定突变位点在待检序列中的位置；(2)根据突变位点的位置，设计引物；(3)PCR扩增；(4)SAP酶处理，除去所述扩增产物中含有的dNTPs；(5)延伸反应，在延伸引物的3’端连接一个碱基；(6)采用树脂纯化延伸反应产物；(7)将纯化后的产物与芯片基质共结晶，将该晶体放入质谱仪的真空管，然后用瞬时纳秒强激光激发进行质谱检测，确定突变的基因型。本发明解决了现有核苷酸突变位点的检测方法灵敏度低、准确性低的问题。

主权项

1、一种核苷酸突变位点的检测方法，包括如下步骤：(1)针对待检核苷酸序列可能存在的突变位点，并确定突变位点在待检序列中的位置；(2)根据突变位点的位置，设计3条引物，其中，一对为扩增引物，每条引物长度至少30bp，其5’端各含10bp的tag；另一条为延伸引物，长度为17-28bp，正好位于突变位点的5’端；(3)通过PCR扩增，获得含有所述突变位点的靶序列扩增产物；(4)通过SAP酶处理，除去所述扩增产物中含有的dNTPs；(5)通过延伸反应，在延伸引物的3’端连接一个碱基，且该碱基正好与突变位点上的碱基互补，延伸反应所使用的原料是以扩大分子量差异为目的进行过质量修饰的四种ddNTP分子；(6)采用树脂纯化延伸反应产物；(7)将纯化后的产物与芯片基质共结晶，将该晶体放入质谱仪的真空管，然后用瞬时纳秒强激光激发进行质谱检测，确定突变的基因型。