[发明专利]用于四种细菌PCR检测的多重扩增内标的制备方法无效
| 申请号： | 200810032998.8 | 申请日： | 2008-01-24 |
| 公开（公告）号： | CN101220393A | 公开（公告）日： | 2008-07-16 |
| 发明（设计）人： | 史贤明;龙飞;施春雷;马瑜丹;张忠明 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11;C12N15/10;C12N15/63 |
| 代理公司： | 上海交达专利事务所 | 代理人： | 王锡麟;王桂忠 |
| 地址： | 200240*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种食品安全技术领域的用于四种细菌PCR检测的多重扩增内标的制备方法，步骤为：根据金黄色葡萄球菌vicK基因、沙门氏菌invA基因、单核细胞增生李斯特菌hlyA基因和副溶血弧菌toxR基因设计特异性检测引物；采用重叠PCR技术将金黄色葡萄球菌vicK基因、沙门氏菌invA基因、单核细胞增生李斯特菌hlyA基因和副溶血弧菌toxR基因的特异性检测引物序列拼接成一条核苷酸片段，构建多重扩增内标；将该人工序列克隆到质粒载体pMD－18T，构建含多重扩增内标序列的质粒pMD－mIAC；多重扩增内标分别在金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特菌和副溶血弧菌检测中的验证。本发明在确保检测准确性与高效性的同时大大降低检测成本。 | ||
| 搜索关键词： | 用于 细菌 pcr 检测 多重 扩增 标的 制备 方法 | ||
【主权项】：
1.一种用于四种细菌PCR检测的多重扩增内标的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：第一步，利用生物信息学的方法，根据金黄色葡萄球菌vicK基因、沙门氏菌invA基因、单核细胞增生李斯特菌hlyA基因和副溶血弧菌toxR基因设计特异性检测引物；第二步，采用重叠PCR技术将金黄色葡萄球菌vicK基因、沙门氏菌invA基因、单核细胞增生李斯特菌hlyA基因和副溶血弧菌toxR基因的特异性检测引物序列拼接成一条核苷酸片段，构建多重扩增内标；第三步，采用分子生物学技术将该人工序列克隆到质粒载体pMD-18T，构建含多重扩增内标序列的质粒pMD-mIAC；第四步，多重扩增内标分别在金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌和副溶血弧菌检测中的验证。
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