[发明专利]空肠大肠弯曲菌快速检测试剂盒的制备和检测方法

摘要

本发明涉及一种用环介导等温扩增技术的空肠大肠弯曲菌快速检测试剂盒的制备和检测方法。该试剂盒内有环介导等温扩增反应液、Bst DNA聚合酶、显色剂；反应液含有反应缓冲液、dNTP、硫酸镁、上游内引物5－ACAGCTATACCACTTGAACCATTTAAAGTGAACCTGA TGTTTTACCT－3、下游内引物5－ACAAACATCCCGCCTCATAGTTTAAT CTCTTCTAAGCTTGCATCT－3、上游外引物5－TTCCAAATTATG ATGGTTCAGA－3、下游外引物5－TGGACCTTTAATAAACTGCATAA－3和甜菜碱；检测空肠大肠弯曲菌的方法包括细菌DNA的提取、空肠大肠弯曲菌的环介导等温扩增、显色检测。其优点是快速、特异性强、灵敏度高而且成本低。

主权项

1.一种空肠大肠弯曲菌快速检测试剂盒，其特征在于其中的试剂包括(1)-(4)：(1)环介导等温扩增反应液：包括10×Thermopol反应缓冲液、300-500μmol/L dNTP、2-4mmol/L硫酸镁、0.8-1.2μmol上游内引物、0.8-1.2μmol/L下游内引物、0.2-0.3μmol/L上游外引物、0.2-0.3μmol/L下游外引物和1-1.5mol/L甜菜碱；其中10×Thermopol反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X-100；其中上游内引物：5-ACAGCTATACCACTTGAACCATTTA-AAGTGAACCTGATGTTTTACCT-3、下游内引物：5-ACAAACATCCCGCCTCATAGTTTAA-TCTCTTCTAAGCTTGCATCT-3、上游外引物：5-TTCCAAATTATGATGGTTCAGA-3、下游外引物：5-TGGACCTTTAATAAACTGCATAA-3；(2)UNG酶：1U/μL；(3)Bst DNA聚合酶：8U/μL；(4)显色剂：为10％的荧光染料SYBR GREEN I或者DNAGreen。