[发明专利]一种制备骨形态发生蛋白BMP－2成熟肽的方法无效
| 申请号： | 200710067138.3 | 申请日： | 2007-01-31 |
| 公开（公告）号： | CN101235084A | 公开（公告）日： | 2008-08-06 |
| 发明（设计）人： | 林陈水;付水星;任慧颖;黎小军;徐伟;于真真;许明;郑小玲;钱俊青 | 申请（专利权）人： | 浙江工业大学 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C12N15/09;C12N15/12;C12N1/21;C12P21/02 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 | 代理人： | 黄美娟;袁木棋 |
| 地址： | 310014*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种制备重组骨形态发生蛋白BMP－2成熟肽的方法：删除DsbA基因信号肽第2～18个氨基酸编码基因，保留第一个甲硫氨酸的密码子作为起始密码子，得到片段重组于表达载体中，获得的重组质粒1；将骨形态发生蛋白BMP－2完整成熟肽的DNA重组于重组质粒1中DsbA基因的下游，获得重组质粒2；将重组质粒2转化入表达宿主菌株的菌体中，得到工程菌经培养、添加诱导剂使目的基因表达，破菌、分离纯化得到DsbA－BMP－2融合蛋白，蛋白酶酶切DsbA－BMP－2融合蛋白，经分离得到所述的骨形态发生蛋白BMP－2成熟肽。本发明方法制得的产物可与天然BMP－2成熟肽氨基酸序列完全一致，实现可溶性胞内融合表达，融合蛋白可以用Ni2+亲和层析一步纯化，进一步简化了BMP－2复性前的纯化步骤。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 形态 发生 蛋白 bmp 成熟 方法 | ||
【主权项】：
1. 一种骨形态发生蛋白BMP-2成熟肽的制备方法，其特征在于所述方法包括如下顺序步骤：(1)删除DsbA基因信号肽第2～18个氨基酸编码基因，保留第一个甲硫氨酸的密码子作为起始密码子，得到编码不含信号肽的DsbA的DNA片段，将该片段重组于表达载体中，获得重组质粒1；(2)将编码骨形态发生蛋白BMP-2完整成熟肽的DNA重组于重组质粒1中DsbA基因的下游，获得重组质粒2；(3)将重组质粒2转化入宿主菌株的菌体中，得到工程菌，所述宿主菌为无硫氧还蛋白还原酶缺陷的大肠杆菌宿主的DE3溶原菌；(4)工程菌在含有抗生素的培养基中培养，添加诱导剂使目的基因表达；(5)工程菌细胞经破菌，分离纯化得到BMP-2融合蛋白；(6)蛋白酶酶切BMP-2融合蛋白，经分离得到所述的骨形态发生蛋白BMP-2成熟肽。
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