[发明专利]长穗偃麦草E染色体RGA－SCAR特异分子标记及其应用

摘要

本发明公开了一种长穗偃麦草E染色体RGA－SCAR特异分子标记的方法，该方法通过在NBS和LRR保守编码区上下游分别设计简并引物，PCR扩增后获得不同E染色体上的抗性基因类似片段，在NBS及LRR保守区域设计E染色体RGA－SCAR特异性引物，并确定针对不同引物的PCR扩增程序与反应体系。本发明能够在短时间内精确鉴定二倍体长穗偃麦草不同染色体，效果快捷明显，有良好的推广前景，为小麦野生近缘种长穗偃麦草外源基因源高效转育并改良普通栽培小麦提供了分子辅助选择基础。

主权项

1、一种长穗偃麦草E染色体RGA-SCAR特异分子标记的方法，其特征在于包括以下步骤：a、采用CTAB法从新鲜幼嫩叶片中提取基因组DNA，并检测DNA浓度及质量。b、依据序列比对软件DNAMAN5.0序列比对结果，在NBS和LRR保守编码区上下游分别设计简并引物。c、利用b步骤设计的简并引物对一套完整的中国春-二倍体长穗偃麦草二体附加系进行扩增，获得不同E染色体上的抗性基因类似片段。d、将具有NBS及LRR保守区域的序列进行加工后，通过序列比对软件DNAMAN5.0比对，观察序列结构并依据序列间同源性设计E染色体RGA-SCAR特异性引物。e、在中国春-长穗偃麦草二体附加系及代换系中验证不同E染色体上RGA-SCAR引物的特异性和稳定性，并确定针对不同引物的PCR扩增程序与反应体系。