[发明专利]测量活细胞内青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白浓度比的方法

摘要

一种测量活细胞内青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白浓度比的方法，该方法是利用三通道荧光共振能量转移显微镜测量活细胞内青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白浓度比的方法，包括下列步骤：①测量三通道荧光共振能量转移显微镜漏过系数；②利用三通道荧光共振能量转移显微镜测量活细胞内CFP蛋白与YFP蛋白浓度之比。本发明方法的测量结果表明：校正了CFP和YFP荧光的串扰，校正了由于FRET的发生而引起的CFP荧光的减少和YFP荧光的增加，测量的结果稳定，标准误差比较小。

主权项

1、一种测量活细胞内青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白浓度比的方法，特征在于该方法是利用三通道荧光共振能量转移显微镜测量活细胞内青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白浓度比的方法，青色荧光蛋白以下简称为CFP蛋白，黄色荧光蛋白以下简称为YFP蛋白，包括下列步骤：①测量三通道荧光共振能量转移显微镜漏过系数：在中国仓鼠卵巢癌细胞，简称为CHO细胞，内分别表达CFP蛋白和YFP蛋白，分别测量表达YFP蛋白的CHO细胞在荧光共振能量转移通道，简称为FRET通道和YFP通道内的平均荧光强度，利用下列公式计算漏过系数a，a＝IFRET(Y)/IYFP(Y) 分别测量表达CFP蛋白的CHO细胞在FRET通道和CFP通道内的平均荧光强度，根据下式计算漏过系数b，b＝IFRET(C)/ICFP(Y) 式中：IFRET(Y)表示YFP蛋白在FRET通道内的平均荧光强度，IYFP(Y)表示YFP蛋白在YFP通道内的平均荧光强度，IFRET(C)表示CFP蛋白在FRET通道内的平均荧光强度，ICFP(C)表示CFP蛋白在CFP通道内的平均荧光强度；②利用三通道荧光共振能量转移显微镜测量活细胞内CFP蛋白与YFP蛋白浓度之比：在CHO细胞内共表达CFP和YFP，共表达CFP和YFP的CHO细胞用三通道荧光共振能量转移显微镜分别记录CFP通道、YFP通道和FRET通道内的平均荧光强度，根据下式，计算三CHO细胞内的CFP蛋白和YFP蛋白浓度之比：$\frac{\left[D\right]}{\left[A\right]}=\frac{(F_C+G\times \mathrm{CFP})}{a\times \mathrm{YFP}}\times \frac{{ϵ}_{\mathrm{YFP}}\left(440\right)}{{ϵ}_{\mathrm{CFP}}\left(440\right)}$ 式中：FC为净FRET值，FC＝FRET-a×YFP-b×CFP G称为G参数，εYFP(440)/εCFP(440)指在440nm波长的光激发时，YFP蛋白与CFP蛋白的吸收系数之比，其值为0.094，CFP和YFP分别表示CFP通道和YFP通道内的平均荧光强度，FRET为FRET通道的平均荧光强度。