[发明专利]测量活细胞内青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白浓度比的方法

说明书

技术领域

本发明涉及活细胞内青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白，特别是一种利用荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer，以下简称为FRET)测量活细胞内青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白浓度比的方法。

背景技术

FRET是一种无辐射的能量转移过程，是处于激发态的荧光团(供体)通过长程的偶极子—偶极子的相互作用把能量转移给另一个分子(受体)，导致供体荧光的淬灭和受体发光的增强的过程。参见【G.W.Gordon，G.Berry，X.H.Liang，B.Levine，B.Herman，Quantitative fluorescence resonance energy transfer measurements usingfluorescence microscopy.Biophys.J.74(1998)2702-2713】。为了便于FRET的发生，实验中需要合理的控制供体与受体的浓度之比，然而在活细胞内测量供体与受体的浓度之比是比较困难的事情，目前青色荧光蛋白(cyan fluorescent protein，简称为CFP蛋白)和黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein，简称为YFP蛋白)是最常用的FRET供体-受体对，测量活细胞内CFP与YFP浓度之比是迫切需要解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提出一种测量活细胞内青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白浓度比的方法，

本发明的技术解决方案如下：

一种测量活细胞内青色荧光蛋白和黄色荧光蛋白浓度比的方法，更确切地说是利用三通道荧光共振能量转移显微镜测量活细胞内青色荧光蛋白(cyan fluorescentprotein，简称为CFP)和黄色荧光蛋白(yellow fluorescent protein，简称为YFP)浓度之比的方法。

推导三通道荧光共振能量转移显微镜测量活细胞内CFP与YFP浓度比的公式：

表观荧光共振能量转移效率E_app可以表述如下式【参见M.G.Erickson，B.A.Alseikhan，B.Z.Peterson，D.T.Yue，Preassociation of calmodulin with voltage-gatedca²⁺ channels revealed by FRET in single living cells.Neuron 31(2001)973-985】：

          E_app＝E×D_b＝[1-S_CFP(DA)_before/S_CFP(DA)_after]    (1)

这里，E指FRET效率，D_b指发生FRET的CFP分子数与总的CFP分子数的比例，

S_CFP(DA)_before和S_CFP(DA)_after指YFP荧光蛋白被漂白前后，CFP荧光蛋白的平均荧光强度。

同时，表观的FRET效率E_app又可以表述如下【参见T.Zal，N.R.Gascoigne，Photobleaching-Corrected FRET Efficiency Imaging of Live Cells.Biophys.J.86(2004)3923-3939】，

E app = F C F C + G × CFP - - - ( 2 ) ]]>