[发明专利]固态发酵微生物总DNA提取方法

摘要

本发明提供了一种固态发酵微生物总DNA的提取方法，包括以下几个步骤：先用磷酸盐缓冲液洗涤样品，再结合超声波破碎和CTAB抽提液抽提固态发酵微生物细胞，粗提DNA经预冷异丙醇沉淀和70％预冷乙醇洗涤，最后经纯化试剂盒纯化，并用核糖核酸酶除去RNA；本发明方法能得到高产量的DNA，且可以同时提取细菌、放线菌、真菌DNA，从而可快捷、全面的了解固态发酵样中微生物的多样性。

主权项

1.一种固态发酵微生物总DNA提取方法，包括以下步骤：a.样品的洗涤：固态发酵样须用0.1M磷酸盐缓冲液洗涤三次；b.DNA的提取：往上述洗涤后的固态发酵样中加入异丙醇，用超声波冰浴超声，样品破碎以后，高速离心至样品完全沉淀，去上清液；往沉淀中加入十六烷基三甲基溴化胺抽提液，65℃水浴，完全反应后，加入等体积的氯仿-异戊醇，高速离心至沉淀完全，并回收水相；在回收水相中加入1/10体积的CTAB-NaCl溶液，65℃水浴待完全反应后，加入等体积的氯仿-异戊醇，再高速离心至沉淀完全，并回收水相；在回收水相中加入0.6倍体积的预冷异丙醇，并在-20℃放置待充分反应后，再高速离心至沉淀完全，去上清液；沉淀用预冷的乙醇重复洗涤和干燥，干燥后的沉淀溶于TE缓冲液中，得到粗提DNA；c.DNA的纯化：上述粗提的DNA经纯化试剂盒纯化以后，在其纯化产物中加入核糖核酸酶，37℃水浴消化，以除去RNA。