[发明专利]多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用

摘要

本发明涉及一种多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用，属于生物工程中微生物发酵领域。本发明采用多种微生物菌种按比例组合制作成发酵剂，原料与秸秆混合均匀拌入活化后的发酵剂，装入容器进行发酵后即成成品。本发明发酵剂制作的饲料，或使奶牛产奶量日均提高0.5－1Kg，延长泌乳期；奶牛产后恢复快，提前进入旺奶期，消化吸收快，抑制肠道致病菌滋生；具有独特的酸香味增加奶牛的食欲，进食速度提高，没有残留，提高饲料利用率15％。经对饲料进行分析：粗蛋白提高20％－25％,粗纤维降低10％－15％，饲料成本大大降低，企业效益明显。本发明的产品可达到绿色饲料的要求，实现安全饲养。

主权项

1、一种多菌种微生物发酵剂的制作方法及其在奶牛精饲料中的应用，其特征在于：发酵剂的制作步骤如下：菌种培养：(1)原斜面菌种：1)8种细菌：双氮纤维单胞细胞Cellulomnasbiazotea；产黄纤维单胞细胞Cellulominas flavigena；枯草杆菌10264Bacillus subtilis；凝结芽孢干菌Bacillus coagulans；嗜酸乳杆菌Lactobacillus acidophilus；淀粉乳杆菌Lactobacillus amylophllus；费氏丙酸杆菌propionibacterium freudenreichii，枯草芽胞杆菌Bacillus subtilis TO13055；2)3种酵母菌：产朊假丝酵母Candida utilis；糖化酵母Saccharomyces diastaticus；酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae；3)3种霉菌：斜卧青霉Penicillium decumbers；米根霉Rhizopusoryzar；黑曲霉Aspergillus niger；(2)纯种分离：从原斜面菌种取1环放入杀过菌且装有玻璃珠和100ml水的三角瓶中摇匀，以无菌操作，用无菌吸管取1ml放入已杀菌并装有培养基的平皿中，用无菌玻璃刮刀将菌液刮匀，并用该刮刀连续刮第二、第三、第四、第五个相同的平皿即为不同的稀释分离平皿，放入25-38℃保温箱中培养；(3)斜面培养：双氮纤维单孢菌，产黄纤维单孢菌，用稻草粉培养基：稻草3-5％煮沸10分钟加酵母粉少许，自然PH；枯草杆菌10264、枯草芽孢杆菌TQ13055，牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏0.5％蛋白胨1％、氯化钠0.5％、PH 7.2-7.6；凝结芽孢杆菌：酵母粉0.8％、蛋白胨1％、葡萄糖0.7％、磷酸二氢钾0.18％、硫酸镁0.11％、PH7.0-7.2；费氏丙酸菌：酵母粉0.8％、蛋白胨1％、蔗糖1.5％、磷酸铵0.4-0.6％、PH6.8-7.0；嗜酸乳杆菌：脱脂奶粉10％、糖5％、加琼脂1.5-2％、自然PH、温度：38-39℃、培养4-8小时；淀粉乳杆菌：酵母膏1％、蛋白胨1.0％、(NH4)2SO40.5％、蔗糖2.0％、PH7.2-7.4；将平皿中长出的单个菌落各取一种接入相应培养基中，液体培养基加琼脂1.5-2％，125℃杀菌后接菌，在25-35℃条件下静止培养20-40小时，放入4℃冰箱保存；发酵培养基：双氮纤维单胞菌、产黄纤维单孢菌、发酵培养基：草粉2％、麸皮0.5％、粉酵母0.5％；PH 72-7.4、温度：28-30℃、培养20-22小时；枯草芽孢杆菌10264 TQ13055：牛肉膏蛋白胨培养基，牛肉膏0.5％、蛋白胨1％、氯化钠0.5％、葡萄糖0.2％、PH 7.2-7.6；温度：25-30℃、时间：22-24小时；凝结芽孢杆菌：酵母膏1.0％、蛋白胨1.0％、葡萄糖0.6％、磷酸二氢钾0.2％、硫酸锰0.1％、硫酸镁0.11％、PH 7.0；温度：25-30℃、时间22-24；费氏丙酸菌：玉米桨0.5％、葡萄糖0.2％、磷酸铵0.02％、K2HPO4 0.08％、CoCl2：(0.1％取0.04ml)蒸溜水100ml、PH 6.8-7.0、温度：25-30：时间：24-28小时；嗜酸乳杆菌：蛋白胨1.0％、牛肉膏1.0％、酵母膏0.5％葡萄糖2％、K2HPO40.2％、醋酸钠0.5％、柠檬酸二钠0.2％、MgSO4·7H2O 0.2％、MnSO4·4H2O 0.1％、奶粉1％、吐温80.1％、PH6.0-6.5、温度：38-39℃、培养4-8小时；淀粉乳杆菌：可溶性淀粉2.0％、MgSO4·7H2O 0.05％、KNO3 0.1％、FeSO40.001％、NaCL 0.05％、K2HPO4 0.05％、PH 7.2-7.4、温度：25-30℃、时间：26-28小时；酵母菌：产朊假丝酵母Candida utilis；糖化酵母Saccharomyces斜面培养基：蛋白胨1.0％、酵母粉0.5％、葡萄糖2.0％、PH 6.5或自然PH；酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae斜面培养基：5％玉米水解液加MgSO4·7H2O 0.3％、K2HPO4 0.15％、CaCO3 0.5％、酵母粉0.5％、PH 5-6、时间：24小时；霉菌：斜卧青霉Penicillum decumbers斜面培养基：土豆20％、蔗糖2％、K2HPO4 0.3％、MgSO4·7H2O 0.15％、琼脂2.0％、PH6.0；发酵培养基：NaNO3 0.3％、KCl 0.05％、K2HPO4 0.1％、FeSO4 0.001％、蔗糖3％、MgSO4·7H2O 0.05％、PH 6.7、时间：48-56小时；米根霉斜面培养基同斜卧青霉：米根霉Rhizopus oryzar发酵培养基：Vogel′s母液4％、半纤维素1％、微量元素0.01％ NHCl 5ml、FeSO4 0.25g、MnSO4H2O 0.98g、Zndl20.83g、CoCl2 1.0g蒸溜水100ml、温度：28-30、时间：2天；黑曲霉Aspetgillus niger斜面培养基：NaNO3 0.3％、KCl0.05％、K2HPO4 0.1％、FeSO4 0.001％、蔗糖3.0％、MgSO4·7H2O0.05％、琼脂2.0％PH 6.7、时间：28-32小时；发酵培养基：Vogel′s母液4％、微晶纤维素1％、微量元素0.01；其配方同米根霉；(4)摇管：从长好的斜面菌种中取一环接入已杀菌装有10ml液体培养基试管中，除嗜酸乳杆菌、费氏丙酸菌静止培养外，其余菌种在25-38℃条件下摇床培养1-2天；(5)三角瓶培养：用500ml三角瓶装入相应的培养基100-120ml杀菌后，将摇培好的试管在酒精灯下倒入三角瓶中25-38℃摇培1-2天；(6)上罐扩大培养：将各菌种所需相应的液体培养基配制后，高压灭菌0.1MPa、时间：20-50分钟，冷却到30-38℃用无菌操作，将已培养好的三角瓶菌种接入罐中，接种量为2-10％、在25-38℃条件下，通风或不通风培养，通风培养8-12m3/h，罐压0.01-0.08Mpa，培养时间18-24小时，不通风需隔4-5小时搅拌一次。