[发明专利]利用三裂叶野葛毛状根生产葛根素的方法无效
| 申请号： | 200310112223.9 | 申请日： | 2003-11-20 |
| 公开（公告）号： | CN1544619A | 公开（公告）日： | 2004-11-10 |
| 发明（设计）人： | 施和平 | 申请（专利权）人： | 华南师范大学 |
| 主分类号： | C12N5/14 | 分类号： | C12N5/14;C12N1/21;C07H17/07;C12P19/60 |
| 代理公司： | 广州粤高专利代理有限公司 | 代理人： | 王楚鸿 |
| 地址： | 510631广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | 本发明提供一种利用三裂叶野葛毛状根生产葛根素的方法，该方法包括三裂叶野葛外植体的选择与处理、发根农杆菌的活化培养、叶片外植体的感染及其毛状根的诱导、无菌三裂叶野葛毛状根系的获得及三裂叶野葛毛状根的液体培养及其葛根素的提取等步骤。该方法解决了三裂叶野葛毛状根的诱导、液体培养及其葛根素生产的重要技术环节。由于所使用的毛状根具备在无外源激素培养基上快速自主生长的特性，因而该技术不仅能克服利用细胞培养物生产葛根素时细胞培养物生长缓慢、需外加激素维持其生长的不足，而且具有葛根素产出率高而稳定、培养时操作简便、成本较低等优点。 | ||
| 搜索关键词： | 利用 三裂叶 野葛 毛状根 生产 葛根 方法 | ||
【主权项】：
1、一种利用三裂叶野葛毛状根生产葛根素的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)三裂叶野葛外植体的选择与处理：以三裂叶野葛无菌苗的幼嫩叶片为材料，切块待用，或切块后置于MS培养基中预培养24-48h后待用；(2)发根农杆菌的活化培养：取含野生型Ri质粒的发根农杆菌ATCC15834单菌落接种至不添加或添加了20-100μM乙酰丁香酮的YEB液体培养基中，在26±2℃恒温暗环境中振荡培养24-48h；然后对该菌液进行无菌离心，所得菌体沉淀用MS液体培养基进行悬浮、稀释，制成菌悬液待用；(3)叶片外植体的感染及其毛状根的诱导：将叶片外植体置于用MS液体培养基悬浮稀释的发根农杆菌菌悬液中，26±2℃下浸泡5-30分钟，取出，吸干水分和多余菌液后，于无外源激素的MS培养基中26±2℃放置2-3天后，转接至添加了400-800mg/L头胞噻肟钠或羧苄青霉素的无外源激素的MS培养基上，于26±2℃、12-14h/d光照、光照强度1500-2500lux条件下除菌培养10-15天后，从叶片外植体形成的愈伤组织上产生毛状根；(4)无菌三裂叶野葛毛状根系的获得：将所产生的毛状根切下，并置于含400-800mg/L头胞噻肟钠或羧苄青霉素的无外源激素的MS培养基上进行单根离体培养，每隔一周转接一次，转接4-6次后获得无菌的能在无激素培养基上自主生长的毛状根；用冠瘿碱高压纸电泳和PCR对毛状根进行遗传转化鉴定后，挑选生长迅速的转化毛状根进入下一步操作；(5)三裂叶野葛毛状根的液体培养及葛根素的产生：将毛状根转接至改良MS液体培养基中，于26±2℃恒温、转速为90-110r/min的条件下振荡暗培养12-16天，取出毛状根、烘干、研磨成粉，用80％的甲醇或95％乙醇结合2-4分种超声波处理进行过夜浸提，提取液冻干成粉末状，即为所要的葛根素。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于华南师范大学，未经华南师范大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/patent/200310112223.9/，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 同类专利
- 具有广谱活性的杀昆虫多肽和其用途-201580056324.X
- A.R.阿巴德;A.C.克劳;B.波兰德;X.施;T.C.沃尔菲 - 先锋国际良种公司
- 2015-10-09 - 2023-06-06 - C12N5/14
- 本发明提供了从苏云金芽孢杆菌菌株获得的编码具有对昆虫害虫(包括鳞翅目和鞘翅目昆虫)的杀虫活性的多肽的核酸及其变体和片段。本发明的具体实施方案提供编码杀虫蛋白的分离核酸、包含本发明实施方案的核酸的杀虫组合物、DNA构建体及转化的微生物和植物。这些组合物可在用于防治害虫特别是植物害虫的方法中使用。
- 甘蓝型油菜-菘蓝E单体附加系在抑制流感病毒中的应用-202110478900.7
- 金梅林;杨丽;邹忠;龚文孝;黄坤;钟鸣;赵雪锦;赵丽;夏小涵;李再云;盛锋;杜雪竹;孙小美;康超 - 华中农业大学
- 2021-04-30 - 2022-03-08 - C12N5/14
- 本发明属于生物技术领域，具体涉及甘蓝型油菜‑菘蓝E单体附加系在抑制流感病毒中的应用。本发明提供了一种提取甘蓝型油菜‑菘蓝E单体附加系有效成分的方法，利用该方法制备的提取物，做抗流感病毒实验，发现，在A、D、E、F 4个单体附加系和A、B、C 3个双体附中，只有E单体附加系在细胞和动物水平均具有显著的抗流感病毒效果，对人流感PR8、猪流感G4和禽流感H5N6均具有明显的抗病毒效果，该组合物不仅没有毒性而且能促进细胞生长，提高细胞活性，可显著抑制细胞凋亡。可以作为抗病毒的药食蔬菜、饲料等进行开发和利用，用作人和动物的保健性食品，保障动物及人类健康。
- 一种甘蔗体细胞杂交的方法-201811277785.1
- 李素丽;宋亚妮;刘芳君;龙安四 - 广西大学
- 2018-10-30 - 2021-11-26 - C12N5/14
- 本发明属于植物体细胞杂交技术领域，具体涉及一种甘蔗体细胞杂交的方法，包括以下步骤：(1)亲本原生质体的制备；(2)原生质体的钝化；(3)原生质体融合诱导物的添加：其中一种亲本原生质体一种用硅酸盐水溶液培养后，与另一种亲本原生质体等体积混合得到混合原生质体；(4)原生质体的融合：将步骤(3)得到的混合原生质体进行电融合。本发明利用硅与植物细胞膜表面的糖脂具有很高的亲和力的原理，两种亲本原生质体在硅的诱导下融合，达到提高一对一融合率的作用，杂交后代同时具有ROC22甘蔗高产高糖、高耐旱性的基因，同时具有GT28甘蔗的高糖耐寒基因。
- 甘蓝型油菜-菘蓝G单体附加系在抑制新型冠状病毒SARS-CoV-2中的应用-202110478468.1
- 金梅林;回显锋;杨丽;李再云;黄坤;龚文孝;邹忠;张宇飞;钟鸣;杜雪竹;孙小美;盛锋 - 华中农业大学
- 2021-04-30 - 2021-10-29 - C12N5/14
- 本发明属于生物技术领域，公开了甘蓝型油菜‑菘蓝G单体附加系在抑制新型冠状病毒SARS‑CoV‑2中的应用。本发明首次发现甘蓝型油菜‑菘蓝G单体附加系提取物在细胞感染模型上具有显著的抗SARS‑CoV‑2病毒的效果，且对细胞无毒副作用。甘蓝型油菜‑菘蓝附加系具有大规模种植的优点，可以给抗SARS‑CoV‑2制剂的生产提取提供充足的原料，成本低，产量大，可以作为抗病毒的药食蔬菜、饲料等进行开发和利用，用作人和动物的保健性食品，保障动物及人类健康。
- 一种以色素突变作为标记的紫菜杂交育种方法-202110690969.6
- 李信书;孙杰;王楠 - 江苏海洋大学
- 2021-06-22 - 2021-08-31 - C12N5/14
- 本发明是一种以色素突变作为标记的紫菜杂交育种方法，该方法以母本株叶状体作为材料诱变获得色素突变体株；从母本突变株叶状体上部取一小片与父本株野生型叶状体上部取下的数片小片共同培养；两种小片性别分化各种产生雌雄配子，雌配子位于叶片上与雄配子受精，已形成的果孢子囊的色素突变体小片单独培养，收集释放的果孢子培养让其萌发形成丝状体藻落；挑选呈野生型颜色藻落单独培养释放壳孢子；选择颜色嵌合叶片培养至1cm大小，将颜色为野生型的部分切下单独培养至性成熟发生自交，将获得的果孢子培养成丝状体，从而获得杂交的孢子体。该方法以色素突变体作为标记，简单易行，结果便于观察，可快速获得杂交株，提高紫菜育种效率。
- 一种人工提纯与保存羊栖菜受精卵干纯品的方法-201811131122.9
- 林立东;吴明江;张旭;陈斌斌;郑影 - 温州市洞头区水产科学技术研究所;温州大学
- 2018-09-27 - 2021-06-15 - C12N5/14
- 本发明提出了一种人工提纯与保存羊栖菜受精卵干纯品的方法，包括如下操作步骤：羊栖菜种菜选取与育苗池暂养，羊栖菜受精卵收集与浓缩，羊栖菜受精卵定量封装与冷藏，羊栖菜受精卵的解冻，羊栖菜受精卵清洗与除杂，羊栖菜受精卵初纯品脱盐、脱水与浓缩，羊栖菜受精卵初纯品低温冻干，羊栖菜受精卵干初品除杂和羊栖菜受精卵干纯品定量封装与保存等9项内容，本发明可为以羊栖菜受精卵干纯品为实验材料，实施组学技术研究和有效天然产物提取研究，提供科学、规范的人工提存与保存操作方法。
- 固氮酶多肽在植物细胞中的表达-201880023380.7
- C·C·伍德;R·S·艾伦;冈田尚子;A·C·瓦尔登;K·T·蒂尔布鲁克;M·C·泰勒 - 联邦科学技术研究组织
- 2018-02-06 - 2019-11-19 - C12N5/14
- 本发明涉及在植物细胞线粒体中产生固氮酶多肽的方法和手段。本公开提供了表达一种或多种MTP‑Nif融合多肽和/或翻译的NifD‑NifK和NifE‑NifN融合多肽的植物细胞。本公开还提供了编码这些融合多肽的核酸构建体以及用于表达这些融合多肽并将其靶向至植物细胞线粒体的表达构建体。本公开还提供了包括本发明的植物细胞的转基因植物和由其获得的产品。
- 植物调控元件及其用途-201380031796.0
- J·阿伦斯;S·彻里安;P·J·罗伊达;L·L·路非亚;W·吴;谢嘉丽 - 孟山都技术公司
- 2013-04-10 - 2019-08-20 - C12N5/14
- 本发明提供可用于调节植物中的基因表达的DNA分子和构建体及其核苷酸序列。还提供包含与异源可转录多核苷酸可操作地连接的DNA分子的转基因植物、植物细胞、植物部分和种子以及它们的使用方法。
- 一种促进水稻多细胞融合的方法-201711499314.0
- 张国栋;刘佳音;刘鹏飞;徐春莹;葛旭娟;米铁柱 - 青岛袁策生物科技有限公司
- 2017-12-31 - 2018-09-21 - C12N5/14
- 本申请公开了一种促进水稻多细胞融合的方法，利用不同品种水稻种子的成熟胚，诱导出愈伤组织；酶解获得原生质体，将原生质体混合，利用高分子PEG结合高pH‑高Ca2+洗脱法，诱导细胞融合；最后利用AFLP技术筛选杂合体组成，从而得到多细胞融合杂种。包括以下步骤：A.愈伤诱导；B.酶解；C.收集细胞；D.细胞融合；E.原生质体植板培养；F.杂合体分子鉴定。本发明利用原生质体融合技术，使多个水稻品种的原生质体彼此融合，形成多细胞杂种并诱导培养出多倍体的方法。
- 植物中经空间修饰的基因表达-201280010285.6
- 多米尼克·洛克;亨利克·韦彼·斯盖勒 - 加利福尼亚大学董事会
- 2012-01-30 - 2017-10-24 - C12N5/14
- 本发明提供了工程改造植物的方法，所述植物具有基本上集中在植物的木质部组织导管的木质素沉积或木聚糖沉积。本发明也提供了工程改造植物以增加所需的生物合成产物的生产量的方法，例如，以获得增加的次生细胞壁沉积或增加的蜡/角质积累。本发明的经工程改造的植物可用于生物能生产，例如，通过提高源自所述植物的生物质的密度和可消化性和改善水利用要求。
- 具有增加的除草剂耐受性的植物-201480055865.6
- R·阿朋特;S·特雷施;M·维切尔;J·莱尔希尔;D·马萨;T·塞萨尔;T·米茨纳;J·M·保利克;C·布罗默尔 - 巴斯夫农业公司
- 2014-08-12 - 2016-07-27 - C12N5/14
- 本发明涉及包含野生型或突变型看麦娘(Alopecurus)PPO酶的植物和获得这类植物的方法。本发明还涉及一种在植物栽培地点控制杂草的方法，所述方法包括步骤：通过，在所述地点提供包含至少一种核酸的植物，所述核酸包含了编码向所述地点施加有效量的PPO抑制型除草剂时抵抗或耐受所述除草剂的野生型或突变型看麦娘PPO酶的核苷酸序列。
- 具有增加的除草剂耐受性的植物-201480024769.5
- M·帕斯特纳克;S·特雷施;H·克劳斯;J·赫茨勒;J·莱尔希尔;T·米茨纳;J·M·保利克 - 巴斯夫欧洲公司
- 2014-04-28 - 2016-01-20 - C12N5/14
- 本发明涉及一种在植物栽培地点控制不想要的植物的方法，所述方法包括步骤：在所述地点提供包含至少一种核酸的植物，所述核酸包含了编码抵抗或耐受HPPD抑制性除草剂的野生型羟苯基丙酮酸双加氧酶或突变羟苯基丙酮酸双加氧酶(mut-HPPD)的核苷酸序列和/或编码抵抗或耐受HPPD抑制性除草剂的野生型尿黑酸茄呢基转移酶或突变尿黑酸茄呢基转移酶(mut-HST)的核苷酸序列，向所述地点施加有效量的所述除草剂。本发明还涉及包含mut-HPPD的植物和获得这类植物的方法。
- 一种羊栖菜受精卵和胚胎保存方法-200810249547.X
- 逄少军;张志怀;张玉荣 - 中国科学院海洋研究所
- 2008-12-23 - 2010-06-30 - C12N5/14
- 本发明涉及经济褐藻的培育，具体的说是一种羊栖菜受精卵和胚胎保存方法。具体为：将羊栖菜雌雄亲本在光照强度10000-50000勒克斯，光照周期12-16小时，温度18-24摄氏度的条件下培养，并且24小时以内更换一次水，培养7-10天，使得亲本实现同步排放卵子精子，待亲本同步排放卵子精子后12-24小时内收集受精卵，在受精后的8-16小时内，在0-8℃下完成受精卵和胚胎的收集，继而保存。本发明在羊栖菜卵子受精后8-16小时内利用低温方法，将其在适宜的培养基中培养，继而保存受精卵和胚胎，这样可大幅度的延缓发育过程，使其在假根尚没有形成之前完成异地跨地区运输从而进行苗种培育。
- 用于植物的启动子分子-200580038233.X
- D·M·吕津斯基;I·查夫里尔;T·W·康纳 - 孟山都技术有限公司
- 2005-09-12 - 2007-10-17 - C12N5/14
- 本发明涉及用于在植物中调节基因表达的多核苷酸分子。具体地讲，本发明涉及从大豆(Glycine max)和拟南芥(Arabidopsis thaliana)中分离的启动子，所述启动子可用于调节异源多核苷酸分子在植物中的基因表达。本发明也涉及含有所述异源多核苷酸分子的表达构建体和转基因植物。
- 一种植物细胞质雄性不育系统保持系选育的方法-200610057184.0
- 钱伟;李晓荣 - 钱伟;李晓荣
- 2006-03-14 - 2007-09-19 - C12N5/14
- 一种植物细胞质雄性不育系统保持系选育的方法，属于植物新品系选育技术领域。其特征是将植物细胞质雄性不育系统的细胞核不育基因转育到另一种雄性不育系统的轮回选择群体中，从中选育出配合力强的保持系。与已有技术比较，本发明既能拓宽细胞质雄性不育系统保持系的遗传基础，又能简化检测其配合力的程序，从而提高选育强优势组合的机率。
- 用于植物中克隆表达的系统和方法-200580005502.2
- 维达季·尤西波夫;玛丽娜·斯卡尔金斯卡雅 - 美国弗劳恩霍夫股份有限公司
- 2005-02-18 - 2007-02-28 - C12N5/14
- 本发明提供用于生成克隆根系、克隆根细胞系、克隆植物细胞系和克隆植物与用于在这些细胞系和植物中表达基因产物的系统和方法。根据某些本发明方法，将含有一以可操作方式与一启动子连接的感兴趣多核苷酸的病毒载体导入一植物或其一部分。利用含有所述病毒载体的植物材料(例如，叶片部分)形成克隆根系，例如，通过使植物材料与发根土壤杆菌(A.rhizogenes)接触以形成发根。所述发根源自单个祖细胞且因此为克隆的。这些克隆根系含有所述病毒载体且可表达所述感兴趣多核苷酸。克隆根细胞系、克隆植物细胞系和克隆植物自克隆根获得。根据本发明某些其它方法，将含有一以可操作方式与一启动子连接的感兴趣多核苷酸的病毒载体导入保持在培养中的植物细胞系细胞(例如，预先存在或新近得到者)。通过(例如)连续多轮富集直至得到展现稳定表达的细胞群体来获得表达感兴趣多核苷酸的克隆植物细胞系。使用标准方法自所述克隆植物细胞系获得其细胞含有所述病毒载体的克隆植物。本发明提供利用本发明方法生成的克隆根系、克隆根细胞系、克隆植物细胞系和克隆植物。
- 利用三裂叶野葛毛状根生产葛根素的方法-200310112223.9
- 施和平 - 华南师范大学
- 2003-11-20 - 2004-11-10 -
- 本发明提供一种利用三裂叶野葛毛状根生产葛根素的方法，该方法包括三裂叶野葛外植体的选择与处理、发根农杆菌的活化培养、叶片外植体的感染及其毛状根的诱导、无菌三裂叶野葛毛状根系的获得及三裂叶野葛毛状根的液体培养及其葛根素的提取等步骤。该方法解决了三裂叶野葛毛状根的诱导、液体培养及其葛根素生产的重要技术环节。由于所使用的毛状根具备在无外源激素培养基上快速自主生长的特性，因而该技术不仅能克服利用细胞培养物生产葛根素时细胞培养物生长缓慢、需外加激素维持其生长的不足，而且具有葛根素产出率高而稳定、培养时操作简便、成本较低等优点。
- 转化植物质体和制备转质体基因组植物的方法-01807068.X
- N·V·屈奇克 - 依康遗传学股份有限公司
- 2001-03-22 - 2003-05-21 -
- 公开了转化质体和将转化的质体从一种植物移到另一种的方法。还公开了转质体基因组植物、其部分和其衍生的种子。还公开了一种植物的细胞或原生质体，或其培养物(例如愈伤组织培养物)，其中细胞或原生质体含有从遗传上不同的植物的细胞获得的，并含有感兴趣的核酸的质体。
- 含有趋异的大豆同工型钙调蛋白基因以获得多重疾病抗性的转基因植物-99100269.5
- 许源道;赵武济;宋佖淳;郑昌昊 - 韩国锦湖石油化学株式会社
- 1999-01-27 - 2000-08-09 -
- 本发明提供了用大豆同工型钙调蛋白(SCaM)基因转化的转基因植物和其植物细胞,它们显示了对广谱的植物致病原的抗性大大增强。本发明也提供了含有SCaM基因的表达载体以及寄主细胞,其中在具有植物致病原抗性的植物中已经导入了在表达载体中的所述基因。表达异种的SCaM的转基因植物显示出对通常感染植物的真菌、细菌和病毒的抗性增强。
- 转录控制序列和方法-96195657.7
- J·查佩尔;C·A·G·科尔内特;殷绍辉 - 肯塔基州州立大学托管委员会
- 1996-05-07 - 1998-08-26 -
- 本发明公开了定性和定量的转录调控序列,前者在植物、植物组织和植物细胞的可诱导基因表达中发挥功能,后者在植物、植物组织和植物细胞中增加下游遗传信息的转录表达。本发明也公开了提高转基因植物抗病性的方法和重组DNA分子,尤其是一种控制能够引发植物超敏反应的蛋白质表达的可诱导启动子。
- 植物中海藻糖的增强累积-97102986.5
- O·J·M·高德津;T·C·维沃尔德;R·W·H·H克鲁特维根;E·沃德 - 莫根国际公司
- 1997-01-10 - 1997-11-26 -
- 本发明提供了在能产生海藻糖酶的植物细胞中生产海藻糖的方法，通过使具有产生海藻糖和海藻糖酶必需遗传信息的植物细胞生长，或培养含有这种植物细胞的植物或其一部分，特征在于在海藻糖酶抑制剂存在时使所述植物细胞生长或培养所述植物或其一部分。
- 专利分类
