[发明专利]提高DNA检测灵敏度的方法

摘要

本发明涉及基于DNA碱基配对原理上的一种提高灵敏度的检测DNA杂交与错配的方法。分别采用不同粒径的纳米金颗粒作为石英晶体微天平(QCM)的表面处理剂和作为DNA检测器的识别放大器。通过双官能团的连接剂对石英晶体微天平金属表面的修饰，将纳米金属颗粒固定在QCM表面上，然后将单链DNA探针固定在这个用纳米金属颗粒修饰的表面上，该DNA探针与待测定的靶标DNA单链杂交，靶标DNA比探针长，其一部分与探针DNA互补，固定在石英晶体微天平上，另一部分与连结有纳米金属颗粒的互补DNA单链配对，以增大其重量，从而提高石英晶体微天平对靶标DNA的检测灵敏度。此方法其检测灵敏度可达到10－16M以上。

主权项

1.一种提高DNA检测灵敏度的方法，其特征是：该方法的步骤为：(1).双官能团化合物在石英晶体微天平表面的固定在保湿的密闭室中，将浓度为5×10-4mol/L的双官能团化合物连接剂的溶液滴加到清洁的QCM的电极表面上，浸泡后，分别用乙醇或癸醇和二次重蒸水冲洗，自然晾干；(2).纳米金属颗粒在石英晶体微天平表面的组装在保湿的密闭室中，将步骤(1)中固定有双官能团化合物连接剂的QCM的电极表面用金属纳米溶胶浸泡至吸附达到饱和，然后分别用缓冲溶液和二次重蒸水冲洗，自然晾干；(3).DNA探针在修饰过纳米金属颗粒后的QCM的电极表面的固定在步骤(2)组装有纳米金属颗粒的QCM的电极片上，滴加10-5mol/L的DNA探针的缓冲溶液，在保湿的密闭室中放置一段时间后，分别用缓冲溶液和二次重蒸水冲洗，晾干后测定晶体震荡频率变化值；重复以上步骤，直到DNA探针在修饰过纳米金属颗粒后的QCM的电极表面达到吸附饱和；(4).DNA的杂交检测在保湿的密闭室中，在温度为15℃～65℃下，将浓度为10-16mol/L的互补DNA序列的待测靶标溶液滴加到经步骤(3)处理过的QCM的电极表面上进行探针DNA与靶标DNA的杂交，然后用缓冲溶液和二次重蒸水冲洗，并用石英晶体微天平检测其频率变化，得到有靶标DNA的QCM的电极晶片，待用；(5).纳米金属颗粒对DNA传感器的倍增在金属纳米颗粒溶胶中，加入含有与靶标DNA末端互补的DNA的磷酸缓冲溶液，静置，随后用磷酸缓冲溶液对其进行稀释，进一步放置；然后高速离心移去上层清液，以除去未与纳米金属粒子结合的DNA；沉淀物质即为DNA功能化的纳米金属颗粒，将下层沉淀用磷酸缓冲溶液清洗，再离心分离出沉淀；重复以上洗涤过程，然后将经过DNA功能化的纳米金属颗粒分散到缓冲溶液的容器里备用；在保湿的密闭室中，将功能化的纳米金属颗粒的DNA滴加到步骤(4)中有靶标DNA的QCM的电极晶片上，在15℃～65℃下进行杂交后用缓冲溶液和二次重蒸水冲洗，并用石英晶体微天平分别检测其频率变化；所述的缓冲溶液是磷酸缓冲溶液，其pH＝6.83。