[发明专利]金属硫蛋白的制备方法

摘要

本发明是一种用蛋白质工程技术高效制备金属硫蛋白的方法。现有技术一直难以得到比较高的产率，虽然融合蛋白表达技术为金属硫蛋白的表达提供了新方法，但是仍存在产率低这个不足之处。本发明用基因工程方法构建金属硫蛋白或其突变体基因的表达质粒，转入大肠杆菌工程菌中培养发酵，诱导后加入金属离子，继续培养，收集菌体。菌体超声破菌、离心后用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B亲和层析柱静态吸附，柱上凝血酶酶切，再经柱层析脱盐，盐梯度洗脱，收集目标蛋白。本发明方法可得纯度达95％以上的目标蛋白。用本发明方法制备的猴金属硫蛋白I的六个突变体蛋白，产量与纯度均与野生型重组蛋白类似。

主权项

1.一种金属硫蛋白的制备方法，其特征是：(1)用蛋白质工程技术构建出表达金属硫蛋白GST融合蛋白的大肠杆菌工程菌；(2)将金属硫蛋白GST融合蛋白的大肠杆菌工程菌接种于2YT培养液，常规培养7～16小时，然后用2YT稀释90-100倍后继续扩大培养3～4小时，然后加入IPTG至浓度0.001～1.0mM继续培养，再加入两价金属离子至其浓度是0.1～5.0mM，继续培养3～6小时；(3)菌体超声波破菌，离心，上清液用谷胱甘肽琼脂糖凝胶4B亲和柱静态吸附，淋洗液中加入两价金属离子至其浓度是0.1～1.0mM，在亲和柱上凝血酶静置酶切，再经柱层析，脱盐，分离纯化即可。